リンパ管新生因子VEGF-Cとその受容体VEGF-R3の発現抑制による癌転移抑止

通过抑制淋巴管生成因子VEGF-C及其受体VEGF-R3的表达抑制癌症转移

基本信息

批准号：
17016030
负责人：
武井佳史
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

遠隔転移あるいはリンパ節転移した進行癌の治療はとても困難で、『転移』は癌による死亡の決定的要因である。腫瘍のリンパ管新生因子であるVEGF-Cとその受容体VEGF-R3に着目し、腫瘍内部において、これらの因子の発現・生合成を抑え込むRNAiシステムを構築。構築したRNAiを実際のヌードマウス癌転移モデルに応用し、in vivoレベルでの癌転移抑制を検討した。(1)ヒトVEGF-Cの発現を抑制するsiRNAを作成した。ヒトVEGF-C遺伝子のmRNAを解析し、効果が予測される10種のsiRNAを化学合成した。これらのsiRNAをVEGF-Cを高発現するヒト前立腺癌細胞(PC-3)に対して、リポフェクション法による導入を行い、VEGF-Cの発現を抑制するsiRNA塩基配列数種を決定した。蛋白レベルでの抑制効果をELISA法で、RNAレベルでの抑制効果をRT-PCR法で証明した。最もVEGF-C発現の抑制効果の高いsiRNAについてのELISA測定値は下記の如くであった。(VEGF-C siRNA,178±24pg/ml ; No treatment,4088±229pg/ml[n=4 dishes])。RNAiによって約96%のVEGF-Cを消去できた。(2)ヒトVEGF-R3の発現を抑制するsiRNAを作成した。ヒトVEGF-R3遺伝子のmRNAを解析し、RNAi効果が予測される14種のsiRNAを化学合成した。これらのSiRNAをVEGF-R3を高発現する癌細胞に導入し、有効siRNA塩基配列1種を決定した。蛋白レベルでの抑制効果をウエスタンブロット法およびELISA法で、RNAレベルでの抑制効果をRT-PCR法で検討した。(3)in vivoモデルでの癌転移抑制治療法の検討VEGF-Cを高発現するヒト胃癌細胞のリンパ行性転移株(AZL5G)をヌードマウス胃壁に同所移植したモデルを作成し、VEGF-C siRNAによる癌転移抑制効果を検討中である。siRNAとアテロコラーゲンを混合し、全身投与経路による治療を検討している。

远处或淋巴结的晚期癌症的治疗非常困难，“转移”是癌症导致死亡的决定性因素。侧重于VEGF-C，这是肿瘤淋巴管中的新因素及其受体VEGF-R3，RNAi系统建立在肿瘤内部，可抑制这些因素的表达和合成。将内置的RNAi应用于实际的裸小鼠转移模型，以减少体内水平的癌症过渡。（1）创建siRNA来抑制人VEGF-C的表达。分析了人VEGF-C基因的mRNA和10种siRNA的化学物质，这有效。将这些siRNA引入了高度表达VEGF-C的人类核细胞（PC-3），并确定抑制VEGF-C表达的siRNA碱基序列的数量。 RT-PCR方法证明了ELISA方法中蛋白质水平和RNA级抑制作用的抑制作用。 ELISA测量的siRNA值（具有高效的VEGF-C表达）如下。（VEGF-C siRNA，178±24pg/ml；无治疗，4088±229pg/ml [n = 4盘]）。 RNAi可以消除约96％的VEGF-C。（2）创建siRNA以抑制人VEGF-R3的表达。分析了人VEGF-R3基因的mRNA，并合成了14种预测RNAi效应的siRNA。将这些siRNA引入高度表达VEGF-R3的癌细胞中，并确定了一种有效的siRNA碱基序列。通过RT-PCR方法检查了RT-PCR方法，用于蛋白质水平的蛋白质印迹和ELISA方法。（3）在体内模型中检查癌症转移治疗方法，创建了一种模型，该模型具有人类胃癌细胞的淋巴动态过渡菌株（AZL5G），这些模型在裸鼠星壁上高度表达VEGF-C，VEGF-我们正在考虑效果C siRNA抑制癌症的癌症。它们与siRNA和Aterocolagen混合，以使用整个身体给药途径来考虑治疗。

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Midkine antisense oligodeoxynucleotide inhibits renal damage induced by ischemic reperfusion

中期因子反义寡聚脱氧核苷酸抑制缺血再灌注引起的肾损伤

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Kidney International Vol.67 No.4
影响因子：
0
作者：
Sato W;Takei Y;Yuzawa Y;Matsuo S;Kadomatsu K;Muramatsu T
通讯作者：
Muramatsu T

In vivo delivery technique of nucleic acid compounds using atelocollagen : Its use in cancer therapeutics targeted at the heparin-binding growth factor midkine

使用去端胶原的核酸化合物体内递送技术：其在针对肝素结合生长因子中期因子的癌症治疗中的应用

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Gene Therapy and Molecular Biology Vol.9 No.B
影响因子：
0
作者：
Takei Y;Kadomatsu K
通讯作者：
Kadomatsu K

Antisense oligodeoxynucleotide as to the growth factor midkine suppresses neointima formation induced by balloon injury

生长因子中期因子的反义寡脱氧核苷酸抑制球囊损伤诱导的新内膜形成

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
American Journal of Physiology -Heart and Circulatory Physiology Vol.288 No.5
影响因子：
0
作者：
Hayashi K;Banno H;Kadomatsu K;Takei Y;Komori K;Muramatsu T
通讯作者：
Muramatsu T

エレクトロポレーション装置の制御方法

电穿孔设备的控制方法