線条体由来蛋白性物質によるドーパミンニューロン死の制御

纹状体蛋白质物质控制多巴胺神经元死亡

基本信息

批准号：
11157213
负责人：
赤池昭紀
金额：
$ 0.83万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

これまで我々は、グルタミン酸-NO系により誘発されるドーパミンニューロン死を抑制する内在性物質を探索する目的で、培養線条体細胞条件培地および牛胎仔血清(FCS)に含まれる神経保護活性物質の探索を行った。細胞の供給が容易な培養大脳皮質細胞系を用いてグルタミン酸神経毒素に対する作用を検討したところ、その神経保護活性成分はエーテルにより容易に抽出されることを見出した。さらに、条件培地に添加されている牛胎仔血清(FCS)のエーテル抽出も、培養線条体細胞エーテル抽出物よりは弱いながらも有意な保護作用を示すことを見出した。FCSエーテル抽出物がグルタミン酸を抑制するとともにNOドナーのS-nitrosocysteine(SNOC)誘発神経毒性も抑制することから、SNOC神経毒性に対する作用に注目して精製を試みた結果、SNOCおよびグルタミン酸の神経毒性を強力に抑制する分画を得ることに成功した。得られた分画をマススペクトリー法により分析したところ、ほぼ単一の成分に分離されており、その成分の分子量が382であることが明らかになった。本成分のMS/MSによる解析の結果より、既知のステロイドホルモンとは分子量、化学構造が異なる新規ステロイド化合物であることが推定された。FCSに含まれる本化合物の推定濃度は1mg/Lであった。含量が少なく通常のNMRによる解析に供するだけのサンプルを得ることができなかったため、プロトンNMR解析および精密分子量解析を行うことにより、化学組成を決定するとともにステロイド骨格及び置換基の構造に関するデータを得た。その結果、本化合物は水分子が容易にはずれることから分子量382と364の2種類の化学構造の間を容易に遷移すること、ステロイド骨格の3位、4位および17位に特有の置換基が結合していることが明らかになった。本化合物には17位をはじめとして立体配置が不明な不斉炭素が少なくとも2カ所あり、その立体構造の詳細を検討中であるが、新規の神経保護性ステロイドとしてニューロン死の制御に重要な役割を持つことが期待される。

迄今为止，我们已经搜索了培养的纹状体细胞调节培养基和胎牛血清（FCS）中包含的神经保护活性物质，目的是寻找抑制由谷氨酸 - 谷氨酸 - NO系统诱导的多巴胺神经元死亡的内源性物质。当使用易于供应细胞的培养的脑皮质细胞系对谷氨酸神经毒素的影响进行了研究时，发现神经保护活性成分很容易用乙醚提取。此外，发现在条件培养基中添加的胎牛血清（FC）的乙醚提取也表现出明显的保护作用，尽管比培养的纹状体细胞醚提取物弱。由于FCS醚提取物可抑制谷氨酸，并抑制无供体的神经毒性（SNOC）诱导的神经毒性，因此我们尝试纯化其对SNOC神经毒性的作用，因此，我们成功地获得了一种强烈抑制神经毒性的SNOC和GlutAM snoc和Glutam nocic和Glut of snoc和Glutag nocation snoc和glut of。通过质量谱法分析了所得的馏分，并发现它们分为几乎一个成分，并且该成分的分子量为382。该成分的MS/MS分析的结果表明，它是一种新型的类固醇化合物，具有不同的分子量和来自已知类固醇激素的化学结构的不同分子量和化学结构。 FC中包含的该化合物的估计浓度为1 mg/L。由于无法获得含量较小的样品，并且仅通过常规NMR进行分析，因此进行了质子NMR分析和精确的分子量分析，以确定化学成分并获取有关类固醇骨架和取代基结构的数据。结果，据揭示了这种化合物很容易在两个分子量的化学结构（382和364的化学结构）之间过渡，并且由于水分子很容易移动，因此附着类固醇骨干位置3、4和17的取代基。该化合物至少包含两个具有未知构型的不对称碳，包括位置17，目前正在研究其构象的细节，但预计它将在控制神经元死亡作为一种新型神经保护性类固醇中起重要作用。