αーシヌクレインの凝集・蓄積と神経細胞死

α-突触核蛋白的聚集/积累和神经元细胞死亡

• 批准号: 11157206
• 负责人: 岩坪 威
• 金额: $ 0.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11157206/
• 关键词: α-ミヌクレイン; パーキンソン病; Lew小体; Lewy小体型痴呆症; α-ミヌクレイン; パーキンソン病; Lew小体; Lewy小体型痴呆症

家族性パーキンソン病(PD)の原因遺伝子α-synucleinは孤発性PDやLewy小体型痴呆症(DLB)に出現するLewy小体(LB)や多系統萎縮症(MSA)のグリアに出現するglial cytoplasmic inclusion(GCI)の構成成分であることが明らかになり、神経変性における役割が注目されている。本年度はDLB,MSA脳に蓄積したα-synucleinの生化学的分析、培養細胞系を用いたα-synuclein蛋白の諸性質の検討を行った。DLB,MSA脳のLB,GCI多発部位をホモジェナイズ後、段階的に抽出し、抗α-synuclein抗体でウェスタン解析した。トリス,Triton-X可溶画分では正常脳組織に由来すると思われる全長α-synuclein蛋白が多量に抽出され、対照例と差はみられなかった。SDS,尿素可溶画分にはDLB,MSA特異的にα-synuclein免疫反応を示す蛋白が抽出され、主に全長α-synucleinの形をとっていた。ヒトα-synucleinを培養細胞に発現させると、14kDaの全長蛋白に翻訳され、細胞質中に広く分布すると同時に核内にも局在が見られた。cycloheximide処理、S35ラベルによるpulse-chase解析から半減期は約20時間以上であることが解った。またプロテアソーム阻害剤ALLN処理後も、ユビキチン化α-synucleinの出現は見られず、α-synuclein量にも変化はみられなかった。疾患脳特異的に検出された不溶性α-synucleinはDLBではLewy小体や変性神経突起、MSAではGCIに由来するものと考えられ、特異的な翻訳後修飾やプロセシングの解析が次の課題である。またユビキチン・プロテアソーム系はα-synucleinの主要な細胞内代謝経路ではないと推定された。

家族性帕金森氏病（PD）的病因基因已被揭示为胶质细胞质包含（GCI）的组成部分，它出现在散发性PD和Lewy身体痴呆（DLB）和神经胶质细胞质体（GCI）（GCI）（GCI）（GCI）（GCI）中，该作用在多系统中（MSA）引起了该作用（MSA），它吸引了它。今年，我们对积累在DLB和MSA大脑中的α-突触核蛋白进行了生化分析，并使用培养的细胞系检查了α-突触核蛋白蛋白的各种特性。在DLB和MSA脑中LB和GCI多个位点均质后，逐步提取该位点，并使用抗α-核蛋白抗体进行了西方分析。用大量的全长α-突触核蛋白蛋白提取Tris-Triton-X可溶性级分，似乎是从正常的脑组织衍生而来的，并且从对照中没有观察到差异。在SDS和尿素可溶部分中特别提取表现出α-突触核蛋白免疫反应的蛋白质，并主要采用全长α-核蛋白的形式。当人α-突触核蛋白在培养细胞中表达时，将其转化为14 kDa的全长蛋白，并广泛分布在细胞质中并定位在细胞核中。使用S35标签的环己酰亚胺处理和脉搏练习分析表明，半衰期约为20个小时或更长时间。此外，在治疗蛋白酶体抑制剂ALLN后未出现泛素化的α-突触核蛋白，并且观察到α-突触核蛋白的量没有变化。在疾病大脑中特异性检测到的不溶性α-核蛋白被认为是源自DLB中的Lewy体和退化神经突，MSA中的GCI，并且对特定的翻译后修饰和处理的分析是下一个挑战。据估计，泛素 - 蛋白酶体系统不是α-突触核蛋白的主要细胞内代谢途径。