ErbB2を介する腫瘍の悪性形質獲得の分子機構-新規ErbB2活性化リガンドNTAKとneuregulin-4によるシグナル伝達経路-

ErbB2介导的肿瘤获得恶性特征的分子机制-新型ErbB2激活配体NTAK和神经调节蛋白-4介导的信号转导途径-

基本信息

批准号：
11139239
负责人：
東山繁樹
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139239/
关键词：
ErbB2 ErbB3 ErbB4 NTAK neuregulin

项目摘要

neu癌遺伝子がコードするErbB2は受容体型チロシンキナーゼで、腫瘍の悪性化の一端を担うと考えられている。我々が同定したNTAKおよびneuregulin-4はErbB2を活性化する因子であるが、直接ErbB2に結合はしない。そこで、ErbB2活性化の分子機構を解析するために、まずNTAKおよびneuregulin-4とErbB1,2,3,4との蛋白質間相互作用を解析した。さらにNTAKのスプライシングアイソフォームと個々のアイソフォームのErbB2活性化能を検討した。ErbB1からB4の4種類の受容体細胞外ドメインをヒトIgG-Fc融合蛋白質としてCHOに安定発現し、培養上清よりErbB1-4のIgG-Fc融合蛋白質を精製した。これらのリコンビナント蛋白質を用いて、リガンドー受容体の蛋白質相互作用を蛍光偏光法により解析した。その結果NTAKαおよびNTAKβはErbB1,ErbB2に直接結合せず、ErbB3,ErbB4にKD=0.5〜1x10-8Mで直接結合するが、neuregulin-4(NGC)はErbB1,ErbB2,ErbB3,ErbB4への直接の結合は認められなかった。これらの結果より、neuregulin-4(NGC)によるErbB2活性化の機構はNTAKによるものとは明らかに異なることが示唆された。さらに、ErbB2活性化リガンドであるNTAKのスプライシングアイソフォームをPCR法により解析し、ラットで5種類(α1,α2,β,α+β,Don-1,γ,δEGF)、ヒトで2種類(α2,δEGF)を同定した。αアイソフォームはほぼ全ての組織で発現を認めたが、βアイソフォームは脳に発現が限局されていた。このことから、各アイソフォームが個々に特有の生物活性を持つことが予想され、今後の解析が必要と考えられる。

由NEU癌基因编码的ERBB2是一种受体型酪氨酸激酶，被认为在肿瘤的恶性转化中起着作用。我们确定NTAK和Neuregulin-4是激活ERBB2但不直接与ERBB2结合的因素。因此，为了分析ERBB2激活的分子机制，我们首先分析了NTAK和Neuregulin-4和ERBB1、2、3、4之间的蛋白质 - 蛋白质相互作用。此外，研究了NTAK固定同工型和单个同工型的ERBB2激活能力。在人IgG-FC融合蛋白中稳定表达了四种类型的受体细胞外结构域ERBB1至B4，ERBB1-4的IgG-FC融合蛋白从培养上清液中纯化。使用这些重组蛋白，通过荧光极化分析配体受体的蛋白质相互作用。结果，NTAKα和NTAKβ不直接与ERBB1和ERBB2结合，而是直接与Kd = 0.5至1x10-8M的ERBB3和ERBB4结合，但是Neuregulin-4（NGC）并未直接与ERBB1，ERBB2，ERBB2，ERBB3，ERBB3和ERBB4结合。这些结果表明，Neuregulin-4（NGC）激活ERBB2的机制与NTAK的机制明显不同。此外，通过PCR分析NTAK的剪接同工型，ERBB2激活配体，并在大鼠和两种类型（α2，α+β，α+β，dON-1，γ，ΔEGF）中分析了五种类型（α1，α2，β，α+β，DON-1，γ，ΔEGF）。 α同工型几乎在所有组织中表达，但是β同工型位于大脑中。这表明每个同工型都有独特的生物学活性，并且必须进行未来分析。