膜アンカー型細胞増殖因子の変換機構の解析

膜锚定细胞生长因子转化机制分析

• 批准号: 07780513
• 负责人: 東山 繁樹
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780513/
• 关键词: HB-EGF; セレクターゼ; ジャクスタクリン活性; PKC

モンキー腎上皮由来Vero細胞にヒトproHB-EGFを発現した細胞株VeroH細胞を作成し、proHB-EGFのプロセッシングを免疫沈降法およびFACS分析により解析した。その結果、proHB-EGFの大部分は約1.5時間の半減期で細胞内に取り込まれ分解された。しかし、ホルボールエステル等によりC-キナーゼを活性化すると、proHB-EGFや約7分の半減期で分泌型HB-EGFへと効率よく変換された。このことは、HB-EGFのジャクスタクリン活性からパラクリン活性への変換がC-キナーゼを介する系路により制御されていることを示唆している。一方、CHO細胞に発現したヒト型proHB-EGFとマウス型proHB-EGFのジャクスタクリン活性に顕著な差異を見い出し、その原因をヒトーマウスキメラproHB-EGFを用いて解析した。その結果、proHB-EGFのN-末端プロセッシングがジャクスタクリン活性の発現に極めて重要であることを明らかにするとともに、このプロセッシングの担い手がエンドプロテアーゼの1つ、furinであることを示唆した以上、本研究によりproHB-EGFのジャクスタクリン活性はエンドプロテアーゼ、furinによる末端プロセッシング及びC-キナーゼ系路を介するC-末端プロセッシングにより制御されていることを明らかにした。

在源自猴肾上皮的Vero细胞中制备表达人ProHB-EGF的veroH细胞，并通过免疫沉淀和FACS分析分析了ProHB-EGF的加工。结果，将大多数ProHB-EGF占用并降解为半衰期约1.5小时的细胞。但是，当用佛波酯等激活C-激酶时，它有效地转换为ProHB-EGF，并分泌的HB-EGF，半衰期约为7分钟。这表明HB-EGF从近二碱活性转化为旁分泌活性，受到C-激酶介导的道的调节。另一方面，我们发现在CHO细胞中表达的人ProHB-EGF和小鼠ProHB-EGF之间的Jucstarine活性存在显着差异，并使用人小鼠嵌合ProHB-EGF分析了原因。 As a result, it was revealed that N-terminal processing of proHB-EGF is extremely important for the expression of juxtacrilin activity, and that the role of this processing is furin, one of the endoproteases, and that this study revealed that the juxtacrilin activity of proHB-EGF is regulated by terminal processing by endoproteases, furin, and C-terminal processing via the C-kinase tract.

项目成果

Fukuda K.: "Increased mitogenic response to heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in vascular smooth muscle cells of diabetic rats." Arterio.Thrombo.and Vascular Biol.15. 1680-1687 (1995)

Fukuda K.：“糖尿病大鼠血管平滑肌细胞对肝素结合表皮生长因子样生长因子的促有丝分裂反应增加。”

Shishido,Y.: "Heparin-like molecules on the cell surface potentiate binding of diphtheria toxin to the diphtheria toxin receptor/membrane-anchored heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor." J.Biol.Chem.270. 29578-29585 (1995)

Shishido，Y.：“细胞表面上的类肝素分子增强了白喉毒素与白喉毒素受体/膜锚定的肝素结合表皮生长因子样生长因子的结合。”

Murayama Y.: "Localization of Heparin-binding epidermal growth factor-like Growth Factor(HB-EGF)in human gastric mucosa." Gastroenterology. 109. 1051-1059 (1995)

Murayama Y.：“肝素结合表皮生长因子样生长因子（HB-EGF）在人胃粘膜中的定位。”

Higashiyama S.: "The membrane protein CD9/DRAP27 potentiates the juxtacrine growth factor activity of the membrane-anchored heparin-binding EGF-like growth factor." J.Cell Biol.128. 929-938 (1995)

Higashiyama S.：“膜蛋白 CD9/DRAP27 增强了膜锚定肝素结合 EGF 样生长因子的近分泌生长因子活性。”

Kiso S.: "Role of heparin-binding EGF-like growth factor(HB-EGF)as a hepatotrophic factor in rat liver regeneration following partial hepatectomy." Hepatology. 22. 2584-2590 (1995)

Kiso S.：“肝素结合 EGF 样生长因子 (HB-EGF) 作为肝营养因子在部分肝切除术后大鼠肝脏再生中的作用。”