膜アンカー型細胞増殖因子のジャクスタクリン/パラクリン変換の分子機構

膜锚定细胞生长因子近分泌/旁分泌转化的分子机制

• 批准号: 08780586
• 负责人: 東山 繁樹
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780586/
• 关键词: HB-EGF; セレクターゼ; ジャクスタクリン活性; PKC

モンキー腎上皮由来Vero細胞にヒトproHB-EGFを発現した細胞株VeroH細胞を作成し、proHB-EGFのプロセッシングを免疫沈降法およびFACS分析により解析した。その結果、proHB-EGFの大部分は約1.5時間の半減期で細胞内に取り込まれ分解された。しかし、ホルボールエステル等によりC-キナーゼを活性化すると、proHB-EGFは約7分の半減期で分泌型HB-EGFへと効率よく変換された。このことは、HB-EGFのジャクスタクリン活性からパラクリン活性への変換がC-キナーゼを介する系路により制御されていることを示唆している。一方、CHO細胞に発現したヒト型proHB-EGFとマウス型proHB-EGFのジャクスタクリン活性に顕著な差異を見い出し、その原因をヒトーマウスキメラproHB-EGFを用いて解析した。その結果、proHB-EGFのN-末端プロセッシングがジャクスタクリン活性の発現に極めて重要であることを明らかにするとともに、このプロセッシングの担い手がエンドプロテアーゼの1つ、furinであることを示唆した以上、本研究によりproHB-EGFのジャクスタクリン活性はエンドプロテアーゼ、furinによる末端プロセッシング及びC-キナーゼ系路を介するC-末端プロセッシングにより制御されていることを明らかにした。

通过在源自猴肾上皮的Vero细胞中表达人proHB-EGF来创建细胞系VeroH细胞，并通过免疫沉淀和FACS分析来分析proHB-EGF的加工。结果，大部分 proHB-EGF 被细胞吸收并降解，半衰期约为 1.5 小时。然而，当用佛波酯等激活C-激酶时，proHB-EGF有效地转化为分泌型HB-EGF，半衰期约为7分钟。这表明 HB-EGF 从近分泌活性到旁分泌活性的转化是由 C-激酶介导的途径控制的。另一方面，我们发现CHO细胞中表达的人proHB-EGF和小鼠proHB-EGF之间的邻分泌活性存在显着差异，并利用人-小鼠嵌合体proHB-EGF分析了原因。结果，我们发现proHB-EGF的N端加工对于近分泌活性的表达极其重要，并表明弗林蛋白酶（一种内切蛋白酶）负责这种加工。 研究表明，proHB-EGF的近分泌活性。受弗林蛋白酶内切酶的末端加工和 C 激酶途径的 C 末端加工的调节。

项目成果

Nakagawa,T.: "Amino-terminal processing of cell surface heparin-binding EGF-like growth factor upregulates its juxtacrine but not paracrine growth factor activity." J.Biol.Chem.271. 30858-30863 (1996)

Nakakawa,T.：“细胞表面肝素结合 EGF 样生长因子的氨基末端加工上调其近分泌生长因子活性，但不上调旁分泌生长因子活性。”

Inui,S.: "Growth of cultured normal human keratinocytes is mediated by membrane anchored heparin-binding EGF-like growth factor and amphiregulin in associated with CD9." J.Cell.Physiol.(in press). (1997)

Inui,S.：“培养的正常人角质形成细胞的生长是由膜锚定的肝素结合 EGF 样生长因子和与 CD9 相关的双调蛋白介导的。”

Nakata,A.: "Localization of heparin-binding epidermal growth factor-like growth factor in human coronary arteries." Circulation. 94. 2778-2786 (1996)

Nakata,A.：“肝素结合表皮生长因子样生长因子在人冠状动脉中的定位。”

Miyoshi,E.: "High expressin of heparin-binding EGF-like growth factor in rat hepatocarcinogenesis." Int.J.Cancer.67. 1-4. (1996)

Miyoshi,E.：“大鼠肝癌发生过程中肝素结合 EGF 样生长因子的高表达。”

Miyoshi,E.: "Membrane anchored heparin-binding EGF-like growth factor acts as a tumor survival factor in hepatoma cell lines." J.Biol.Chem.(in press.). (1997)

Miyoshi,E.：“膜锚定的肝素结合 EGF 样生长因子在肝癌细胞系中充当肿瘤存活因子。”