赤血球分化に関与するシグナル伝達分子の探索と機能解析

红系分化相关信号分子的搜寻及功能分析

基本信息

批准号：
10878131
负责人：
吉村昭彦
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Kurume University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々は赤芽球様細胞ELM-1を用いてエリスロポエチン(EPO)による赤血球分化の研究を行っている。我々はEGF受容体とEPO受容体のキメラ分子を作成し、さら受容体のチロシン残基に変異を導入することで受容体細胞内ドメインの2つのチロシン残基(Y343、Y401)のいずれかが赤血球分化に必須であることを証明した。これら2つのチロシン残基はSTAT5の活性化に必要であり、STAT5と分化は密接に関連していることが考えられた。しかしながら一方IL3受容体やプロラクチン受容体とのキメラを作成して本細胞に導入したところこれらのキメラ分子はSTAT5を活性化するもののこの細胞の赤血球分化は誘導しないことを明らかにした。したがってIL3受容体になくEPO受容体に特異的な分化シグナルが存在し、STAT5とともに分化の促進に働くと考えられる。そしてそのシグナルの発生にはEPO受容体のY343、Y401のいずれかのりん酸化が必要であることが示唆される。この2つのりん酸化チロシン残基と会合する分子をクローニングするためりん酸化ペプチドによる精製を行った。アミノ酸配列決定の結果これらのペプチドにSTAT5とポスフォリパーゼCγ-2(PLC-γ-2)が会合することを明らかにした。PLC-γ-2の赤血球分化における役割を明らかにするために現在阻害剤やドミナントネガティブフォームを導入する実験を行っている。さらに酵母two-hybrid法による組織的スクリーニングを行うために、JAK2チロシンキナーゼを共発現させたスクリーニング系を開発した。これにエリスロポエチン受容体細胞ドメインをbaitとして様々なライブラリーをスクリーニングしたころフォスファチジル酸キナーゼのp55サブユニットなどが同定できた。新規分子も多数あり現在解析中である。

我们正在研究使用促红细胞生成素细胞ELM-1研究促红细胞生成素（EPO）诱导的红细胞生成素分化。我们创建了EGF和EPO受体的嵌合分子，并进一步将突变引入受体的酪氨酸残基中，表明受体内细胞内域中的两个酪氨酸残基（Y343，Y401）中的任何一个对于嗜红细胞的分化都是必不可少的。 STAT5激活需要这两个酪氨酸残基，并且认为STAT5和分化密切相关。但是，当用IL3受体和催乳素受体创建嵌合体并引入该细胞时，据显示，尽管这些嵌合分子激活了STAT5，但它们并未诱导该细胞中的红细胞分化。因此，人们认为存在特定于EPO受体而不是IL3受体的分化信号，并且与STAT5一起起作用以促进分化。建议生成该信号需要EPO受体Y343或Y401的磷酸化。用磷酸化的肽纯化对与两个磷酸化酪氨酸残基相关的克隆分子进行纯化。氨基酸测序表明，STAT5和后色素酶Cγ-2（PLC-γ-2）与这些肽有关。为了阐明PLC-γ-2在红细胞分化中的作用，我们目前正在进行实验引入抑制剂和显性负面形式。此外，为了通过酵母两杂交法进行组织筛查，开发了JAK2酪氨酸激酶共表达的筛选系统。这使我们能够鉴定磷脂酰酸激酶的p55亚基，等等，当使用促红细胞生成素受体细胞结构域筛选各种文库作为诱饵。也有许多新分子，目前正在进行分析。