Elucidation of the molecular mechanism of memory T cell exhaustion and development of its reprogramming method

阐明记忆T细胞耗竭的分子机制及其重编程方法的开发

基本信息

批准号：
22K19444
负责人：
吉村昭彦
金额：
$ 4.16万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-06-30 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K19444/
关键词：
腫瘍免疫 T細胞免疫記憶疲弊転写因子 CAR-T

项目摘要

記憶T細胞は慢性炎症や腫瘍環境では持続的な抗原刺激と何らかの環境因子によって疲弊状態(exhaustion)に陥る。結果的に疲弊化はがんにおける免疫チェックポイント療法の感受性を下げることになる。本研究は、メモリーT細胞の最終分化段階である「疲弊」の分子メカニズムを明らかにするとともに、これを解除ないし分化転換(リプログラミング)する方法を開発するものである。具体的には転写因子NR4aを中心に、腫瘍特異的な疲弊化メモリーT細胞を用いて疲弊化に重要な遺伝子を破壊ないし強制発現して、幹細胞性をもつステムセルメモリーT細胞(Tscm)に転換させる方法を開発する。本年度はCD8特異的NR4a欠損マウスの樹立とヒトNR4a欠損CAR-T細胞の作成方法の確立と抗腫瘍効果の検証、さらにフィーターフリーによる試験管内 Tscm誘導法の確立を行った。特にフィーターフリー Tscmの誘導に関しては、既報にあるOP9由来の主要な分泌タンパク質17種類をそれぞれCAR-T細胞に添加しナイーブ(CCD7+CD45RA+)分画の増加を指標に検索したところCXCL12が最も強くナイーブ分画を誘導することを見出した。また、フィーダー細胞の培養上清中には含まれていないが、Tscm誘導を促進する因子としてIGF-Iを見出した。これらの因子を組み合わせてIL-7+IGF-I+CXCL12+Notch刺激が効率よくTscmを誘導することを見出した。このようにして作成したTscmは特にTCF7, LEF1, EOMES, BCL6, JUNなどのメモリーマーカー遺伝子発現が高く、逆にNR4a2,NR4a3,BATF,IRF4,PRDM1,TOXといった疲弊マーカー遺伝子の発現が低下していた。さらに個体レベルで強い抗腫瘍効果を発揮した。

记忆T细胞因慢性炎症和持续的抗原刺激以及在肿瘤环境中的某些环境因素而耗尽。结果，疲劳降低了癌症免疫检查点疗法的敏感性。这项研究将阐明记忆T细胞的最后阶段“疲劳”的分子机制，并将开发用于释放或转分解的方法。具体而言，我们将通过使用肿瘤特异性衰竭记忆T细胞破坏或强行表达对疲劳重要的基因，并将其转化为干细胞记忆T细胞（TSCM），从而开发一种用转录因子NR4A转化干细胞记忆T细胞的方法。今年，我们建立了CD8特异性NR4A缺陷型小鼠，建立了一种创建人NR4A缺陷型CAR-T细胞，验证抗肿瘤效应的方法，并建立了一种无馈物的体外TSCM诱导方法。特别是，关于诱导无馈物TSCM，从以前报道的17种主要的OP9衍生的主要分泌蛋白被添加到CAR-T细胞中，当我们寻找NAIVE的增加（CCD7+CD45RA+）作为索引的增加，我们发现CXCL1诱导了Naive Birst the Naive Strimation the Naive Imprions最强的。此外，尽管它不包含在馈线细胞的培养物上清液中，但IGF-I被发现是促进TSCM诱导的因素。通过结合这些因素，我们发现IL-7+IGF-I+CXCL12+Notch刺激有效诱导TSCM。因此产生的TSCM具有很高的记忆标记基因，例如TCF7，LEF1，EOMES，BCL6和JUN，另一方面，耗尽标记基因的表达（例如NR4A2，NR4A3，BATF，IRF4，IRF4，PRDM1，PRDM1和TOX）的表达减少了。此外，它在个体层面发挥了强大的抗肿瘤作用。

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

University de Sherbrooke(カナダ)

舍布鲁克大学（加拿大）

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

T細胞の疲弊と老化を司る転写因子; NR4a

控制 T 细胞耗竭和衰老的转录因子；NR4a

DOI：
发表时间：
2023
期刊：
影响因子：
0
作者：
Fukushima Yuji;Sakamoto Keiko;Matsuda Michiyuki;Yoshikai Yasunobu;Yagita Hideo;Kitamura Daisuke;Chihara Misaki;Minato Nagahiro;Hattori Masakazu;竹馬　俊介;吉村昭彦
通讯作者：
吉村昭彦

Massachusetts Institute of Technology(米国)

麻省理工学院（美国）