GFPトランスジェニックマウスからの細胞移植による造血動態の解析

GFP转基因小鼠细胞移植造血动力学分析

基本信息

批准号：
10877160
负责人：
須田年生
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我が国で開発されたGFPトランスジェニックマウスを用いて造血動態の解析を行い、以下の成果を収めた。1) 胎生9.5日のGFPトランスジェニックマウス胎児Aorta/Gonad/Mesonephros(AGM)領域の細胞、および成体骨髄細胞から、FACSを用いて、造血幹細胞分画を分離し、OP9ストロマ細胞との共培養をおこなった。AGM由来の細胞とその支持細胞であるOP9とが、GFPを蛍光励起することにより、容易に区別できた。血液細胞と血管内皮細胞の分化をrealtimeでモニターしたところ、培養7日目より、AGMおよび骨髄の造血幹細胞分画から血管内皮細胞の分化が認められ、血管網の形成が観察された。2) GFPトランスジェニックマウスの成体骨髄から、造血幹細胞を分離し、致死量放射線照射した野生型マウスに移植し、これらの幹細胞/前駆細胞の分化を蛍光で追跡した。この結果、移植8日目および12日に形成される造血細胞の脾コロニーのなかに、GFP陽性の血管内皮細胞が観察された。さらに、脾細胞の内GFP陽性細胞の分画に、PECAM-1陽性細胞が存在することを確認した。以上、GFPトランスジェニックマウスを用いた解析により、造血細胞と血管内皮細胞の両方向への分化をin vitro,in vivoで明らかにすることができ、今後、2種の細胞系統への分岐機構を解析することが可能となった。

我们使用日本开发的 GFP 转基因小鼠分析了造血动力学，并取得了以下结果。 1) 使用 FACS，从 9.5 天大 GFP 转基因小鼠胎儿的主动脉/性腺/中肾 (AGM) 区域的细胞和成年骨髓细胞中分离造血干细胞组分，并将其与 OP9 基质细胞共培养。我做到了。 AGM 衍生的细胞及其支持细胞 OP9 可以通过 GFP 的荧光激发轻松区分。实时监测血细胞和血管内皮细胞的分化，从培养第7天开始，从AGM的造血干细胞部分和骨髓中观察到血管内皮细胞的分化，并观察到血管网络的形成。 2）从GFP转基因小鼠的成年骨髓中分离造血干细胞，移植到经过致死照射的野生型小鼠中，并利用荧光追踪这些干/祖细胞的分化。结果，在移植第8天和第12天形成的脾脏造血细胞集落中观察到GFP阳性血管内皮细胞。此外，我们确认了脾细胞的 GFP 阳性细胞部分中存在 PECAM-1 阳性细胞。如上所述，通过使用GFP转基因小鼠的分析，我们能够在体外和体内阐明造血细胞和血管内皮细胞的双向分化，并且我们将在未来分析分化为两个细胞谱系的机制。可能这样做。