おとり型核酸化合物(デコイ)を用いた転写因子の生物作用の個体での解析

使用诱饵型核酸化合物（诱饵）分析转录因子在个体中的生物学效应

基本信息

批准号：
10173219
负责人：
森下竜一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10173219/
关键词：
デコイ NFkB E2F 転写因子アポトーシス p53

项目摘要

転写因子を生体で直接制御し、内因性の遺伝子発現を抑制しうるおとり型核酸化合物(デコイ)を用いて、1)転写因子NFkBの生物作用、及び、2)血管新生に関連する転写因子の生物作用、を解明した。内皮細胞における転写因子NFkBの生物作用解明を行い、1)NFkBの内皮細胞における標的遺伝子がサイトカイン(インターロイキン1・6・8)や接着因子(ICAM-VCAM-ELAM)であること、2)リンパ球系の細胞と異なり、内皮細胞ではNFkBがアポトーシスを促進していること、3)NFkB活性化による内皮アポトーシス誘導はアポトーシス抑制因子bcl-2の発現抑制によること、を明らかにした。今後、デコイ法とレポーターアッセイを用いてNFkBによるbcl-2遺伝子の負の発現調節機構を明らかにし、co-repressorを調べる。また、心筋及び神経細胞などのアポトーシスに対し感受性の高い細胞を用いて虚血による細胞死におけるNFkBの生物作用を明らかにすると共に、成熟個体での作用も検討する。一方、がん抑制遺伝子p53の転写因子としての機能に注目し、血管平滑筋細胞における遺伝子発現制御に関する研究を行った。正常血管へのp53に対するアンチセンスの導入は、2及び4週間にバルーン障害後の再狭窄と類似した平滑筋細胞の異常増殖番引き起こした。平滑筋細胞の異常増殖は、主に細胞周期の進展とアポトーシスの減少によるものであった。一方、血管新生因子VEGF遺伝子発現におけるp53の転写機能を解析した結果、p53が平滑筋細胞におけるVEGF遺伝子発現を負に調節していることが、培養細胞及び生体において明らかになった。血管新生における転写因子の相互作用や生物作用は解明されていないので、転写因子HIF(Hypoxia-inducible factorの標的遺伝子や生体における役割を明らかにする。

利用可以直接控制生物体内转录因子并抑制内源基因表达的诱饵型核酸化合物（诱饵），我们将研究1）转录因子NFkB的生物学效应，以及2）与血管生成相关的转录因子的效应. 生物学效应已被阐明。我们阐明了转录因子NFkB在内皮细胞中的生物学效应，发现1）内皮细胞中NFkB的靶基因是细胞因子（白细胞介素1、6和8）和粘附因子（ICAM-VCAM-ELAM），并且2) 淋巴瘤我们发现，与球状细胞不同，NFkB 促进内皮细胞凋亡，3) NFkB 激活诱导内皮细胞凋亡是由于凋亡抑制剂 bcl-2 表达的抑制。今后我们将利用诱饵法和报告基因实验来阐明NFkB负向调节bcl-2基因表达的机制，并研究其共阻遏物。此外，我们将使用高度易凋亡的细胞，例如心肌和神经细胞，来阐明NFkB对缺血性细胞死亡的生物学效应，并检查其在成熟个体中的作用。另一方面，我们关注抑癌基因p53作为转录因子的功能，开展血管平滑肌细胞基因表达调控的研究。将p53反义引入正常血管会导致平滑肌细胞异常增殖，类似于球囊损伤后第2周和第4周的再狭窄。平滑肌细胞的异常增殖主要是由于细胞周期进展和细胞凋亡减少。另一方面，对p53在血管生成因子VEGF基因表达中的转录功能的分析表明，p53负向调节培养细胞和体内平滑肌细胞中的VEGF基因表达。由于转录因子在血管生成中的相互作用和生物学效应尚未阐明，我们将阐明转录因子HIF（缺氧诱导因子）的靶基因及其在活体内的作用。