四肢の運動ニューロン特異的神経回路形成機構

四肢运动神经元特异性神经回路形成机制

基本信息

批准号：
10156232
负责人：
田中英明
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10156232/
关键词：
運動ニューロンニワトリ胚 Eph 受容体型チロシンキナーゼ ephrin

项目摘要

我々はこれまでに、Eph受容体型チロシンキナーゼEphA3、EphA4がニワトリ胚運動ニューロンのサブタイプ特異的に、また発生過程に一過性に発現し、Ephファミリーのリガンドephrin-A2、ephrin-A5によりその軸索成長が阻害されることを見出し、これらのEph関連分子の生体内での機能を解析するため、機能阻害抗体を開発した。これらの機能阻害活性を持つ抗EphA4抗体と抗ephrin-A2抗体のエピトープを決定するために、それぞれのcDNAを用い、PCRにより部分cDNAをクローニングし、293細胞に発現させ細胞の免疫染色と培養上清のイムノブロットで解析した。その結果、抗EphA4抗体はシステインリッチ部分のほぼ中央、抗ephrin-A2抗体B3はN末端近くの約40アミノ酸にエピトープが存在することが明らかになり、さらに領域を小さくして解析中である。さらに、阻害抗体の作用を解析する基礎として腰部運動ニューロンと後肢筋における受容体EphA3とEphA4、リガンドephrin-A2とephrin-A5の発現分布を免疫染色により詳細に解析した。運動ニューロンには全体にEphA4が先に発現され、EphA3は極一部の運動ニューロンに発現される。運動ニューロンにはまたリガンドephrin-A2とephrin-A5のmRNAの発現が観察されていたが、蛋白レベルでも弱いながら発現が観察された。一部の筋の筋周膜と神経線維には受容体EphA3とEphA4、リガンドephrin-A2とephrin-A5共に発現されていた。

到目前为止，到目前为止，EPH受体酪氨酸激酶Epha3和Epha4已在鸡路堤神经元的亚型中特别表达，而EPH家族的配体Ephrin-A2，Ephrin-a5建立了轴向搜索的生长。并开发了功能抑制性抗体，以分析这些相关分子在活体中的功能。为了确定与这些功能抑制剂的抗epha4抗体和抗磷蛋白-A2抗体的表现，请使用每个cDNA通过PCR清洁部分cDNA，在293个细胞中表达它，并用Qing Imnobrot进行培养。结果，抗EPHA4抗体已表明表位存在于N端末端附近的约40个氨基酸中，几乎是富含半胱氨酸的部分的中心，并且正在进一步分析该区域。此外，作为分析抑制性抗体的作用的基础，通过免疫莫诺米详细分析了受体EPHA3和EPHA4，EPHA3和EPHA4，配体Ephrin-A2和Ephrin-A5在后肢肌肉中的表达。 EPHA4首先在运动神经元中表达，EPHA3在非常小的部分运动神经元中表达。在运动神经元中观察到配体ephrin-A2和ephrin-A5的mRNA的表达，但是尽管在蛋白质水平下弱弱，但仍观察到这种表达。某些肌肉肌肉外围和神经纤维均在受体Epha3，Epha4，配体Ephrin-A2和Ephrin-A5中表达。