突然変異体マウス運動ニューロンの解析

突变小鼠运动神经元的分析

基本信息

批准号：
09280228
负责人：
田中英明
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09280228/
关键词：
運動ニューロン SC1 細胞接着分子モノクローナル抗体パンニング法

项目摘要

我々はニワトリ初期胚脊髄の運動ニューロンと床細胞に特異的に発現される免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞接着分子SC1に対するモノクローナル抗体を使用したパンニング法により運動ニューロンを精製し、精製運動ニューロンの培養と運動ニューロンに特異的に発現される分子をRT-PCR法やDifferential display法を用いて探索してきた。このSC1抗体を用いたパンニング法による運動ニューロンの精製方法は大変有効であるが、この抗体はマウスにはクロスしない。したがって、運動ニューロン疾患ミュータントマウスの運動ニューロンに発現される分子を解析する目的で、マウスSC1に対する抗体を作成するためマウスSC1分子のcDNAクローニングを試みていたところ、三菱化学生命科学研究所の藤田らからマウスSC1に対するモノクローナル抗体802C11とそのcDNAクローニングが報告された(第20回日本神経科学会♯1116関根・藍澤、大森、藤田;1997年)。802C11抗体は、マウス初期胚(E10)神経管の床細胞と脊索を染色し、トリSC1と同じパターンで染色が見られ始めるが、E11には抗ニューロフィラメント抗体により多数の運動ニューロンが染色されるにもかかわらず802C11抗体は運動ニューロンを染色しない。E12には運動ニューロンにも染色が確認されたが、全ての運動ニューロンを発生直後から染色するトリSC1抗体とは異なり、一部の運動ニューロンが選択的に染色されていた。これらの結果から、マウスではSC1分子は一部の運動ニューロンにのみ発現されているのか、SC1分子のファミリーが存在し802C11抗体はその一つのメンバーのみを認識している可能性が考えられた。

We purified motor neurons by panning using monoclonal antibodies to the cell adhesion molecule SC1, which belongs to the immunoglobulin superfamily, which is specifically expressed in motor neurons and bed cells in the early chicken embryo spinal cord, and have searched for purified motor neuron cultures and molecules specifically expressed in motor neurons using RT-PCR and differential display methods.通过使用该SC1抗体平固净化运动神经元的这种方法非常有效，但是该抗体不会跨入小鼠。因此，为了分析患有运动神经元疾病的突变小鼠中运动神经元中表达的分子，我们试图将小鼠SC1分子的cDNA克隆产生对小鼠SC1的抗体，并报告了单克隆抗体802C11对小鼠SC1及其CDNA克隆的含量，其cDNA Cloning由FUJITA和其他化学效果（Mistientions）携带。神经科学协会＃1116 Sekine，Aizawa，Omori，Fujita； 1997年）。 802C11抗体染色的早期小鼠胚胎（E10）神经管的床细胞和脊索，染色开始与鸟类SC1相同的模式，但是尽管E11中许多运动神经元的抗神经细胞抗体，但802C11抗体并未染色运动神经元。还证实了E12运动神经元的染色，但与禽类SC1抗体不同，该抗体在发育后立即染色所有运动神经元，一些运动神经元有选择性地染色。这些结果表明，在小鼠中，SC1分子只能在某些运动神经元中表达，或者有一个SC1分子家族，而802C11抗体仅识别一个成员。