突然変異体マウス運動ニューロンの解析

突变小鼠运动神经元的分析

基本信息

批准号：
09280228
负责人：
田中英明
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09280228/
关键词：
運動ニューロン SC1 細胞接着分子モノクローナル抗体パンニング法

项目摘要

我々はニワトリ初期胚脊髄の運動ニューロンと床細胞に特異的に発現される免疫グロブリンスーパーファミリーに属する細胞接着分子SC1に対するモノクローナル抗体を使用したパンニング法により運動ニューロンを精製し、精製運動ニューロンの培養と運動ニューロンに特異的に発現される分子をRT-PCR法やDifferential display法を用いて探索してきた。このSC1抗体を用いたパンニング法による運動ニューロンの精製方法は大変有効であるが、この抗体はマウスにはクロスしない。したがって、運動ニューロン疾患ミュータントマウスの運動ニューロンに発現される分子を解析する目的で、マウスSC1に対する抗体を作成するためマウスSC1分子のcDNAクローニングを試みていたところ、三菱化学生命科学研究所の藤田らからマウスSC1に対するモノクローナル抗体802C11とそのcDNAクローニングが報告された(第20回日本神経科学会♯1116関根・藍澤、大森、藤田;1997年)。802C11抗体は、マウス初期胚(E10)神経管の床細胞と脊索を染色し、トリSC1と同じパターンで染色が見られ始めるが、E11には抗ニューロフィラメント抗体により多数の運動ニューロンが染色されるにもかかわらず802C11抗体は運動ニューロンを染色しない。E12には運動ニューロンにも染色が確認されたが、全ての運動ニューロンを発生直後から染色するトリSC1抗体とは異なり、一部の運動ニューロンが選択的に染色されていた。これらの結果から、マウスではSC1分子は一部の運動ニューロンにのみ発現されているのか、SC1分子のファミリーが存在し802C11抗体はその一つのメンバーのみを認識している可能性が考えられた。

我们使用针对 SC1 的单克隆抗体通过淘选方法纯化运动神经元，并培养纯化的运动神经元，SC1 是属于免疫球蛋白超家族的细胞粘附分子，在早期鸡胚脊髓的运动神经元和底细胞中特异性表达。一直在使用 RT-PCR 和差异显示方法寻找运动神经元中特异性表达的分子。尽管使用该 SC1 抗体纯化运动神经元的淘选方法非常有效，但该抗体不会交叉进入小鼠体内。因此，为了分析患有运动神经元疾病的突变小鼠的运动神经元中表达的分子，我们尝试克隆小鼠SC1分子的cDNA，以创建针对小鼠SC1的抗体。三菱化学生命科学研究所的 Fujita 等人报道了针对小鼠 SC1 的单克隆抗体 802C11 及其 cDNA 克隆（第 20 届日本神经科学学会 #1116 Sekine, Aizawa, Omori, Fujita；1997）。 802C11 抗体对早期小鼠胚胎 (E10) 神经管的床细胞和脊索进行染色，并且染色开始以与禽类 SC1 相同的模式出现，但在 E11 时，许多运动神经元被抗神经丝抗体染色。因此，802C11 抗体不会对运动神经元染色。在 E12 的运动神经元中也观察到染色，但与禽类 SC1 抗体在生成后立即对所有运动神经元进行染色不同，一些运动神经元被选择性染色。这些结果表明，在小鼠中，SC1分子可能仅在某些运动神经元中表达，或者存在一个SC1分子家族，而802C11抗体仅识别其中一个成员。