シアセチルポリアミンの代謝と細胞増殖制御

氰乙酰多胺代谢和细胞生长控制

• 批准号: 08670160
• 负责人: 川喜田 正夫
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670160/
• 关键词: ポリアミン; 腫瘍マーカー; ジアセチルスペルミジン; ジアセチルスペルミン; 物質輸送; LLC-PK_1; ポリアミン抗体

ヒト尿中に存在することが最近見出され、腫瘍マーカーとしてすぐれた特性を持つことが示された新規のポリアミン成分、ジアセチルスペルミジン(DiAcSpd)およびジアセチルスペルミン(DiAcSpm)について、その代謝を明らかにし、悪性腫瘍診断への応用の生化学的基礎を解明することを目的として研究を行い、以下の結果を得た。1.多孔性膜上で培養したブタ腎上皮由来細胞(LLC-PK_1)を用いて、ポリアミン輸送系について検討を行った結果、プトレッシン、スペルミジン、スペルミンのすべてを共通に基質とする輸送体が側底膜に1種類、頂端膜には2種類存在することが明らかになった。腎尿細管におけるポリアミン再吸収のモデルとして頂端膜の輸送系な基質特異性について、放射性基質を合成して詳しく検討した結果、モノアセチルポリアミン、遊離ポリアミンとは異なり、DiAcSpd,DiAcSpmは細胞内に輸送されず、腎臓において再吸収、再利用されないことが明らかになった。再吸収の欠如により生体内における生成量が比較的正確に排泄量に反映されることは、ジアセチルポリアミン(DiAcPA)の腫瘍マーカーとしてのすぐれた特性を規定する要因の一つであると考えられる。2.DiAcPAの代謝の研究にも適用可能な迅速、高感度のDiAcPA定量系を確立するために、DiAcSpd,DiAcSpm特異的抗体の作成とそれらを用いた酵素標識抗体法によるDiAcPA測定系の開発を行った。DiAcSpd,DiAcSpmに類似の分子形状をもつハプテンを作成して抗血清を得、さらにポリアミン固定化カラムを用いた抗体の親和性精製によってDiAcSpd,DiAcSpmのそれぞれに対して高度の選択性を示す特異的抗体を調製することに成功した。この抗体を利用することによって、0.1μM以下のDiAcSpd,DiAcSpmを、共存ポリアミンの妨害を排除して正確に定量することが可能になった。

我们阐明了二乙酰精胺 (DiAcSpd) 和二乙酰精胺 (DiAcSpm) 的代谢，这两种物质是最近发现的人类尿液中存在的新多胺成分，并被证明具有作为肿瘤标志物的优异特性。我们进行的研究旨在阐明其应用于恶性肿瘤的生化基础。肿瘤诊断，并获得以下结果。 1. 使用在多孔膜上培养的猪肾上皮来源细胞（LLC-PK_1）对多胺转运系统进行研究，结果发现，转运蛋白以腐胺、亚精胺和精胺为共同底物，揭示了基底膜有一种类型，顶膜有两种类型。作为肾小管多胺重吸收的模型，我们合成了放射性底物，并详细检查了顶膜转运系统的底物特异性。我们发现，与单乙酰多胺和游离多胺不同，DiAcSpd和DiAcSpm被转运到细胞内。结果表明，该药物不会在肾脏中被重新吸收或重复使用。由于缺乏重吸收，体内产生的量相对准确地反映在排泄量上，这一事实被认为是决定二乙酰多胺（DiAcPA）作为肿瘤标志物的优异特性的因素之一。 2. 为了建立可应用于DiAcPA代谢研究的快速、高灵敏度DiAcPA定量系统，我们创建了DiAcSpd和DiAcSpm特异性抗体，并使用它们的酶标抗体方法开发了DiAcPA测量系统。通过创建分子形状与 DiAcSpd 和 DiAcSpm 相似的半抗原，然后使用多胺固定柱对抗体进行亲和纯化，得到对 DiAcSpd 和 DiAcSpm 均具有高度选择性的特异性抗体。抗体制备成功。通过使用该抗体，可以在 0.1 μM 或更低的浓度下准确定量 DiAcSpd 和 DiAcSpm，而不会受到共存多胺的干扰。

项目成果

Hiramatsu,K.: "Preparation of antibodies highly Specific to N',N^δ_-diacepylspermidine and development of an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) system for its sensitive and specific detection" Journal of Biochemistry. (印刷中). (1997)

Hiramatsu, K.：“制备对 N,N^δ_-二乙酰亚精胺高度特异性的抗体并开发酶联免疫吸附测定 (ELISA) 系统以实现其灵敏和特异性检测”《生物化学杂志》，1997 年。 ）