イオン・溶質輸送と共役ネットワーク

离子/溶质传输和共轭网络

• 批准号: 04266101
• 负责人: 川喜田 正夫
• 金额: $ 95.36万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1992
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1992 至 1994
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-04266101/
• 关键词: 共役物質輸送; Na^+; H^+アンチポーター; H^+; ジペプチドシンポーター; Band 3; テトラサイクリン; アラニンキャリアー; バクテリオロドプシン; K^+-ATPase; イオン輸送; H^+-アンチポーター; ジペプチド輸送系; H^+ヘキソース共輸送; テトラサイクリン排出タンパク質; H^+ーアンチポーター; 酸性アミノ酸輸送系; K^+ーATPase

細胞の膜系における各種のイオンや溶質の共役輸送系の実体とそのネットワークに関して、以下の結果を得た。1.Na^+/H^+-アンチポーター(NHE)のisoformに対する特異的ペプチド抗体を作成し、各isoformの組織における局在性を明らかにした(川喜田)。NHE1 isoformの活性の細胞内pHによる調節の情報がカルモジュリンによって伝達されることを示し、調節に関与する領域を同定した(重川)。腸炎ビブリオNHEのアミロライド結合部位の変異体では、NHEのイオン特異性が同時に変化することを明らかにした(土屋)。2.H^+/ジペプチドシンポーターのcDNAクローニングに成功し、塩基配列を決定した(乾)。腎上皮細胞による有機アニオンの経細胞輸送のin vitro実験系を確立し、プロテインキナーゼCによる活性調節を明らかにした(高野)。3.赤血球膜のアニオン輸送体Band 3の構造をタンパク質化学的に解析し、新しい構造モデルを提案した。(濱崎)。4.テトラサイクリン/H^+アンチポーターのトポロジーおよび反応機構を、復帰変異解析、Cys走査変異体の解析によって詳しく研究し、精細な構造モデルを発表した(山口)。5.好熱菌のアラニンキャリアーの大量発現に成功した。さらに結晶化による詳細な構造解析の方向を指向している(平田)。6.Na^+/K^+-ATPaseのαβ分子集合体形成機構について、H^+/K^+-ATPaseとのキメラを用いて解析し、N末50残基については互換性があることを明らかにした(川村)。また、α1およびα3 isoformの間の特性のちがいがNa^+遊離サイトの基質親和性のちがいに基づくものであることを明らかにした(原)。7.バクテリオロドプシンのH^+移動反応に関与するアミノ酸残基として、Asp85,Asp212,Asp96/Thr46,Trp182を同定することに成功した(前田)。

有关细胞膜系统中各种离子和溶质的共轭传输系统的实体和网络获得了以下结果。 1。针对Na^+/H^+ - 抗胞菌（NHE）同工型的特异性肽抗体，准备揭示每种同工型在组织中的定位（kawakida）。我们表明，通过钙调蛋白传递细胞内pH调节NHE1同工型活性的信息，并鉴定了涉及调节的区域（Shigekawa）。据揭示，颤音溶血的Amiloride结合位点的突变体同时改变了NHE的离子特异性（Tsuchiya）。 2。成功执行了H^+/二肽分类器的cDNA克隆，并确定了碱基序列（干燥）。我们建立了一个体外实验系统，用于通过肾上皮细胞对有机阴离子的跨细胞运输，并揭示了蛋白激酶C（Takano）对活性的调节。 3。蛋白化学分析了红细胞膜中带3的结构，即红色的转运蛋白，提出了一种新的结构模型。 （hamazaki）。 4。通过回归分析和CYS扫描突变体详细研究了四环素/H^+抗植物的拓扑和反应机制，并提出了详细的结构模型（Yamaguchi）。 5。成功表达了大量的嗜热丙氨酸载体。此外，通过结晶（Hirata）详细的结构分析的方向。 6。使用具有H^+/K^+ATPase的嵌合体分析了Na^+/K^+ATPase中αβ分子组装的形成机理，并揭示了50个N末端的残基是兼容的（kawamura）。我们还揭示了α1和α3同工型之间的性能差异基于Na^+ Free位点的底物亲和力差异（原始）。 7。我们成功地鉴定出ASP85，ASP212，ASP96/THR46和TRP182是涉及细菌hopopsin（MAEDA）H^+转移反应的氨基酸残基。

项目成果

Kamata,H.: "Amphiphilic Peptides Enhance thd Efficiency of Liposome-mediated DNA Transfection." Nucleic Acids Research. 22. 536-537 (1994)

Kamata, H.：“两亲性肽增强脂质体介导的 DNA 转染的效率。”

Yamaguchi,A.et al.: "Role of the Conserved Quartet of Residues Located in the N- and C-Terminal Halves of the Transposon Tn10.." Biochemistry. 32. 5698-5704 (1993)

Yamaguchi,A.et al.：“位于转座子 Tn10 N 端和 C 端半部的保守四重残基的作用..”生物化学。

Sasaki,J.: "Nanosecond time-resolved infrared spectroscopy distinguishes two K species in the bacteriorhodopsin photocycle." Biophys.J.(in press). (1995)

Sasaki, J.：“纳秒时间分辨红外光谱区分了细菌视紫红质光循环中的两种 K 物种。”

Aoshima,H.: "Effects of aliphatic alcohols and food additives on nicotinic acetylcholine receptors in Zenopus oocytes" Biosci.Biothech.biochem.58. 1776-1779 (1994)

Aoshima,H.：“脂肪醇和食品添加剂对 Zenopus 卵母细胞烟碱乙酰胆碱受体的影响”Biosci.Biothech.biochem.58。

Y.Komeiji: "Clycine-85 of the trp-repressor of E.coli is important in forming the hydrophobic tryptophan binding pocket:experimental and computational approaches." Prot.Engng.7. 1239-1247 (1994)

Y.Komeiji：“大肠杆菌色氨酸阻遏蛋白的 Clycine-85 对于形成疏水性色氨酸结合袋非常重要：实验和计算方法。”