腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒(TDH)変異毒素を用いたTDHレセプターの解析

使用副溶血弧菌耐热溶血素 (TDH) 突变毒素分析 TDH 受体

基本信息

批准号：
06770200
负责人：
飯田哲也
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770200/
关键词：
腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒変異毒素

项目摘要

本研究では,われわれがこれまでにin vitro mutagenesisの手法で得てきた腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒(TDH)の変異毒素をツールとして用いることにより、毒素蛋白の活性発現機序を解析することを目的として研究を行なった.これまでに得られていたTDH変異毒素のうち,R7と名づけた変異毒素は血液寒天上で野生型TDHの溶血活性を阻害する活性を示した.そこでこのR7についてより詳細な性状の解析を加えた.精製R7の溶血活性は野生型TDHの1000分の1以下に低下していたが,試験管内で野生型TDHの16倍以上の濃度を共存させた場合R7は野生型TDHの溶血を完全に阻害した.フローサイトメトリーおよびEnzyme immunoassayによりR7のヒト赤血球結合能を解析したところ,R7は野生型TDHにくらべ約50%の赤血球結合能を保持していることが明らかになった.また,野生型TDHにみられる赤血球膜に対するCa^<2+>イオンやpropidium iodide透過性亢進作用はR7では全く観察されなかった.これらの結果は,R7はその溶血活性はほぼ完全に喪失しているものの,ヒト赤血球への結合能は保持する変異毒素であることを示す.このような変異毒素の存在は,いまだ詳細なプロセスが明らかでないTDHによる溶血の機構が赤血球膜への結合とそれ以降の過程の,少なくとも2つのステップよりなることを示唆する.また,R7のように細胞(赤血球)への障害作用はもたないが結合能は保持する変異毒素は,いまだ実体の不明であるTDHレセプターの同定のためのプローブとして有用であると考えられ,現在この方向で研究を継続中である.

在这项研究中，我们使用了通过体外诱变方法获得的颤动溶血溶血毒素（TDH）的突变毒素作为分析毒素蛋白活性机理的工具。在先前获得的TDH诱变中，称为R7的突变毒素表现出抑制野生型TDH对血琼脂的溶血活性的活性。因此，我们对R7的性质进行了更详细的分析。纯化的R7的溶血活性降低到野生型TDH的1000个小于1000，但是当在体外共存的浓度比野生型TDH高16倍时，R7完全抑制了野生型TDH的溶血。与野生型TDH相比，使用免疫测定的R7对R7的流式细胞仪和酶分析表明，R7保留了大约50％的红细胞结合能力。此外，在R7中观察到了野生型TDH中没有碘化渗透性的红细胞膜上的Ca^<2+>离子和丙啶。这些结果表明，R7是一种突变的毒素，它保留其与人类红细胞结合的能力，尽管其溶血活性几乎完全丢失。这种突变毒素的存在表明，TDH溶血的机理仍然未知，包括至少两个与红细胞膜结合的步骤以及随后的过程。此外，没有对细胞（红细胞）（例如R7）扰动的突变毒素被认为是鉴定TDH受体的探针，而TDH受体在物质中仍然未知，并且目前正在沿该方向进行研究。