腸炎ビブリオの産生する耐熱性溶血毒に対する標的細胞上のレセプターの解析

副溶血弧菌耐热溶血毒素靶细胞受体分析

基本信息

批准号：
09770178
负责人：
飯田哲也
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770178/
关键词：
腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒レセプター expression cloning

项目摘要

腸炎ビブリオの産生する耐熱性溶血毒(TDH)に対する標的細胞上のレセプターの同定を目的とし、TDHに対して耐性を示す変異細胞株MR-T1細胞に野生型細胞株であるRat-1細胞から調製したcDNAライブラリを導入することにより、TDHレセプターの機能が回復したクローンの選択を試みている。これまでにRat-1細胞からのcDNAライブラリの作成が完了し、これをMR-T1へ導入することによりをTDHレセプターのexpressioncloningの実験系が確立できた。現在cloningを遂行中である。またこれと同時にTDHに対する細胞膜上のレセプターの性状を解析するためにいくつかの実験を行っており以下のような成績を得ている。標的細胞のエンドグリコセラミダーゼ処理を行い処理細胞に対するTDHの細胞毒性を調べたが活性は低下しなかった。また糖脂質欠損変異細胞であるGM-95はTDHに対して高感受性を示した。これらのことからTDHのレセプターは糖脂質ではないということが示唆された。さらにTDHによる溶血の各種ガングリオシド(GM1、GM2、GD1a.GD1b.GT1b)およびアシアロGM1による阻害活性を調べた。その結果、これまでTDHのレセプターであると報告されていたGT1bガングリオシドによる特異的な阻害は観察されなかった。また、ヒト赤血球を150μg/mlまでの抗GT1b単クローン抗体で処理し、その後TDHによる溶血活性を測定したが、この単クローン抗体による溶血の阻害はみられなかった。以上の結果はGT1bガングリオシドがTDHのレセプターであるというこれまでの考えと反するものであり、何がTDHのレセプターとなっているかについてさらなる検討が必要であることを意味する。以上のような知見を参考にし今後TDHレセプターの同定を遂行していく。

为了鉴定副溶血弧菌产生的热稳定溶血素（TDH）靶细胞上的受体，我们引入了对来自野生型细胞系Rat-1细胞的TDH具有抗性的突变细胞系MR-T1细胞。在准备好的cDNA文库中，我们试图选择具有恢复的TDH受体功能的克隆。至此，我们已经完成了Rat-1细胞cDNA文库的构建，并将其导入MR-T1中，建立了TDH受体表达克隆的实验体系。克隆目前正在进行中。同时，我们进行了多次实验来分析细胞膜上TDH受体的特性，得到了以下结果。用神经酰胺内切酶处理靶细胞，检查TDH对处理细胞的细胞毒性，但活性并未降低。此外，糖脂缺陷型突变细胞GM-95对TDH表现出高度敏感性。这些发现表明 TDH 受体不是糖脂。此外，还研究了各种神经节苷脂（GM1、GM2、GD1a.GD1b.GT1b）和asialo-GM1对TDH诱导的溶血的抑制活性。结果，没有观察到 GT1b 神经节苷脂（之前报道为 TDH 受体）的特异性抑制作用。此外，用高达150μg/ml的抗GT1b单克隆抗体处理人红细胞，然后测量TDH诱导的溶血活性，但没有观察到该单克隆抗体对溶血的抑制。上述结果与之前GT1b神经节苷脂是TDH受体的观点相矛盾，意味着需要进一步研究以确定TDH的受体是什么。我们将根据上述发现继续鉴定TDH受体。