腸炎ビブリオの産生する耐熱性溶血毒に対する標的細胞上のレセプターの解析

副溶血弧菌耐热溶血毒素靶细胞受体分析

基本信息

批准号：
09770178
负责人：
飯田哲也
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770178/
关键词：
腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒レセプター expression cloning

项目摘要

腸炎ビブリオの産生する耐熱性溶血毒(TDH)に対する標的細胞上のレセプターの同定を目的とし、TDHに対して耐性を示す変異細胞株MR-T1細胞に野生型細胞株であるRat-1細胞から調製したcDNAライブラリを導入することにより、TDHレセプターの機能が回復したクローンの選択を試みている。これまでにRat-1細胞からのcDNAライブラリの作成が完了し、これをMR-T1へ導入することによりをTDHレセプターのexpressioncloningの実験系が確立できた。現在cloningを遂行中である。またこれと同時にTDHに対する細胞膜上のレセプターの性状を解析するためにいくつかの実験を行っており以下のような成績を得ている。標的細胞のエンドグリコセラミダーゼ処理を行い処理細胞に対するTDHの細胞毒性を調べたが活性は低下しなかった。また糖脂質欠損変異細胞であるGM-95はTDHに対して高感受性を示した。これらのことからTDHのレセプターは糖脂質ではないということが示唆された。さらにTDHによる溶血の各種ガングリオシド(GM1、GM2、GD1a.GD1b.GT1b)およびアシアロGM1による阻害活性を調べた。その結果、これまでTDHのレセプターであると報告されていたGT1bガングリオシドによる特異的な阻害は観察されなかった。また、ヒト赤血球を150μg/mlまでの抗GT1b単クローン抗体で処理し、その後TDHによる溶血活性を測定したが、この単クローン抗体による溶血の阻害はみられなかった。以上の結果はGT1bガングリオシドがTDHのレセプターであるというこれまでの考えと反するものであり、何がTDHのレセプターとなっているかについてさらなる検討が必要であることを意味する。以上のような知見を参考にし今後TDHレセプターの同定を遂行していく。

为了鉴定靶细胞上的靶细胞上的受体的热溶血毒素（TDH），由弧菌催化溶血性溶血性溶血性溶血性产生，我们正在尝试选择通过引入从野生型细胞型细胞线中，该cDNA库来恢复TDH受体的功能，以恢复其功能，从而恢复了TDH受体的功能。迄今为止，已经完成了从大鼠-1细胞中创建cDNA文库，并将其引入MR-T1中，建立了TDH受体表达克隆的实验系统。目前执行克隆。同时，已经进行了几项实验来分析受体在细胞膜上针对TDH的特性，并达到了以下结果。将靶细胞用内糖果酰胺酶处理，以检查TDH对处理细胞的细胞毒性，但活性并未降低。此外，GM-95是一种糖脂缺陷的突变细胞，对TDH高度敏感。这些表明TDH的受体不是糖脂。此外，研究了TDH抑制TDH的抑制作用（GM1，GM2，GD1A.GD1B.GT1B）和ASIALOGM1。结果，GT1B神经节苷脂未观察到特定的抑制作用，以前曾报道过作为TDH的受体。此外，用抗GT1b的单克隆抗体治疗人类红细胞高达150μg/ml，然后测量TDH溶血活性，但观察到该单克隆抗体对溶血的抑制不抑制。以上结果与先前的GT1B神经毒剂是TDH受体的想法相矛盾，这意味着需要进一步考虑TDH受体。使用上述发现，我们将来将继续识别TDH受体。