腸炎ビブリオ耐熱性溶血毒素の検出における遺伝子増幅法を用いた新規システムの開発

副溶血弧菌热稳定性溶血毒素基因扩增检测新系统的开发

• 批准号: 13760228
• 负责人: 工藤 由起子
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: National Institute of Health Sciences (2002)National Institute of Infectious Diseases (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2002
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13760228/
• 关键词: 腸炎ビブリオ; PCR; 検出; 耐熱性溶血毒素; 食品; 食中毒

わが国において最も多い食中毒の原因菌のひとつである腸炎ビブリオの主な病原因子は、耐熱性溶血毒(TDH)であるといわれている.しかし,TDH産生性腸炎ビブリオが原因食品や環境から分離されることは極めて少なく,その理由は明らかではない.本研究では,その理由のひとつとして,食品からの腸炎ビブリオの検出に問題がある可能性を考えた.TDH産生菌の検出にはPCR法によるtdh遺伝子の検出が有効であることが既に認められており,重要な検出法として汎用されている.そこで本研究のおいてはこのPCR法に着目し,昨年得られた結果を踏まえて各種水産食品の種類によるtdh遺伝子の検出感度の差異,食品成分によるPCRの阻害は水産食品特有に起こるかについて,およびPCRに用いる鋳型DNA精製によるtdh遺伝子検出の改善について検討し,以下の結果を得た.1.水産食品の種類によって熱処理でのtdh遺伝子の検出感度に大きな違いがあることが明らかとなった.本研究で用いた水産食品では検出感度の低い順に,カキ,サバ,タイ,ブリ,イカ,タラ,アサリ,エビ,ホタテとなり,カキとホタテの間では検出感度に約2,000倍の差が認められた.2.PCRの検出感度の低下は水産食品特有ではなく肉類においても認められることが判明した.野菜類については,検出感度の著しい低下は認められなかった.3.磁性ビーズ法,シリカメンブレンフィルター法,グラスファイバーフィルター法の3種類のDNA精製法とも食品中からのtdh遺伝子検出の改善が認められたが,特にグラスファイバーフィルター法で最も改善が認められた.以上のように,生鮮魚介類でも種類によってtdh遺伝子の検出感度に大きな差があり,そしてこれは水産食品特有の現象ではなく肉類にも認められた.また,熱処理によるDNA抽出法のみを用いた場合よりもDNA精製法と組み合わせることによってtdh遺伝子の検出感度が大きく改善されることが本研究によって明らかになった.食品や環境からの分離が難しいとされているTDH産生性腸炎ビブリオを検出するための方法を重ねることによって,今後,さらに食品や環境中からTDH産生性腸炎ビブリオを確実に検出するための方法が確立されることが期待される.

副溶血性弧菌是日本最常见的食物中毒病原体之一，据说其主要致病因素是耐热溶血毒素（TDH）。然而，从引起食物中毒的食品中分离出产生TDH的副溶血弧菌。这种情况极为罕见，原因尚不清楚。在我们的研究中，我们认为造成这种情况的原因之一可能是检测食品中的副溶血性弧菌时存在问题。通过PCR检测TDH基因已被认为可以有效地检测产生TDH的细菌。作为一种重要的检测方法被广泛应用。因此，本研究的目的是我们以这种PCR方法为中心，根据去年获得的结果，我们调查了TDH基因的检测灵敏度因海鲜种类而异、食物成分对PCR的抑制是否只发生在海鲜中以及用途等。通过模板 DNA 纯化改进 TDH 基因检测。获得以下结果： 1. 显然，根据海鲜食品的类型，在热处理过程中TDH基因的检测灵敏度存在很大差异。本研究中使用的海鲜食品的检测灵敏度较低。 ：牡蛎、鲭鱼、鲷鱼、鰤鱼、鱿鱼、鳕鱼、蛤、虾和扇贝。牡蛎和扇贝的检测灵敏度存在约 2,000 倍的差异 2。结果发现，PCR 检测灵敏度的降低并非针对海鲜，但在肉类中也没有观察到灵敏度的显着降低。磁珠法，硅胶在所有三种 DNA 纯化方法（膜过滤法和玻璃纤维过滤法）中都观察到了食品中 TDH 基因检测的改进，但特别是在玻璃纤维过滤法中观察到的最大改进也取决于海鲜的类型。 。后代的检测灵敏度存在较大差异，这种现象并非海鲜所独有，在肉类中也观察到。此外，将DNA纯化与热处理相结合比单独使用DNA提取与热处理更有效。表明检测灵敏度通过结合难以从食品和环境中分离的产TDH副溶血弧菌的检测方法，我们将能够进一步从食品和环境中检测出产TDH副溶血弧菌，希望能够找到一种检测方法。被成立。

项目成果

Yukiko Hara-Kudo, et al.: "Increased sensitivity in PCR detection of TDH-producing Vibrio parahaemolyticus in seafood using purified template DNA"Journal of Food Protection. (印刷中).

Yukiko Hara-Kudo 等人：“使用纯化的模板 DNA 提高了 PCR 检测海鲜中产生 TDH 的副溶血弧菌的灵敏度”《食品保护杂志》（正在出版）。