受容体を介した平滑筋収縮におけるCa^<2+>感受性増強機構と細胞内情報伝達系の研究

受体介导的平滑肌收缩中Ca^2+敏感性增强机制及细胞内信号转导系统研究

• 批准号: 06772154
• 负责人: 佐藤 光利
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Toho University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06772154/
• 关键词: 受容体; 平滑筋; 収縮機構; 細胞内情報伝達; Ca^<2+>感受性; プロテインキナーゼ; ミオシン軽鎖; G-蛋白質

受容体を介したCa^<2+>感受性調節機構に関与する細胞内情報伝達系研究の一環として、α_1-アドレナリン受容体サブタイプ(α_<1A>およびα_<1B>)を介した収縮におけるCa^<2+>感受性増加機構を明らかにした。本年度は特に血管平滑筋に焦点をしぼって実験を行った。1.家兎胸部大動脈摘出切片を用いた細胞内Ca^<2+>濃度の測定および収縮実験細胞内Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)と収縮張力との関係をfura-2/AMを取り込ませた標本を用いて調べた。完全活性薬のノルエピネフリン(NE)および部分活性薬のクロニジン(Clon)で[Ca^<2+>]i(R340/380)と張力の間にはそれぞれ直線性が得られ、収縮に対するCa^<2+>利用率はNEよりもClonの方が大きかった。さらに、クロロエチルクロニジン処理標本(α_<1A>-受容体のみが存在する標本)ではNEのCa^<2+>利用率は未処理標本に比べ有意に大きかった。ミオシン軽鎖キナーゼ阻害薬のKT5926(10^<-5>M)およびK252a(10^<-6>M)はClon(3×10^<-6>M)よりもNE(3×10^<-8>M)の収縮を強く抑制した。クロロエチルクロニジン処理標本ではKT5926およびK252aによる抑制は未処理標本と比較して有意に小さかった。2,ミオシン軽鎖のリン酸化量の測定NE(10^<-5>M)によって45.2%のミオシン軽鎖がリン酸化され、一方Clon(10^<-4>M)は24.8%のミオシン軽鎖がリン酸化され、完全活性薬の方がリン酸化量が多かった。これらの結果より、NEはα_<1A>-およびα_<1B>-受容体サブタイプを介してミオシン軽鎖のリン酸化に依存しない経路とミオシン軽鎖のリン酸化に依存した経路の両方を活性化して収縮に対するCa^<2+>感受性増加を起こすのに対し、Clonは主にα_<1A>-受容体サブタイプを介してミオシン軽鎖のリン酸化に依存しない調節経路をより活性化して収縮に対するCa^<2+>感受性増加を起こしていることを明らかにした。

作为对受体介导的CA^<2+>敏感性调节机制的细胞内信号传导系统的研究，我们已经确定了通过通过α_1-肾上腺素能受体亚型在收缩中提高Ca^<2+>敏感性的机制（α____<1A_>和α__<1b>）。今年，我们进行了一项针对血管平滑肌的实验。 1。使用兔胸主动脉切除的切片和收缩实验测量细胞内Ca^<2+>浓度。细胞内Ca^<2+>浓度（[Ca^<2+>] I）与使用结合fura-2/am的标本研究了细胞内Ca^<2+>浓度之间的关系。在[Ca^<2+>] I（R340/380）之间获得了线性性，分别与完全活跃的药物去甲肾上腺素（NE）和部分活性的药物可乐定（克隆）之间获得了线性性，而Ca^<2+>用于收缩的Ca^<2+>用于克隆的收缩率更大。此外，在氯乙基丙氨酸处理的样品（仅存在α__<1a> - 受体受体的标本）中，NE的Ca^<2+>使用率明显大于未经处理的标本。肌球蛋白轻链激酶抑制剂KT5926（10^<-5> m）和K252A（10^<-6> m）强烈抑制NE（3×10^<-8> m）的收缩（3×10^<-8> m）。在氯乙基丙者处理的标本中，与未经处理的标本相比，KT5926和K252A的抑制作用明显小得多。 2.肌球蛋白轻链NE（10^<-5> m）磷酸化的磷酸化的磷酸化磷酸化的磷酸化45.2％肌球蛋白轻链，而克隆（10^<-4> m）磷酸化的24.8％肌球蛋白轻链，具有较高磷酸化的完全活性药物。这些结果表明，NE激活肌球蛋白光链通过α_<1a> - - - 和α__<1b> - 可靠性亚型导致Ca^<2+>敏感性的增加，而clon的ca^<2+> clon会增加phosphoration-consecration the raplation-consecration the rysecai，ca^<2+> <α_<1b>α_<1b> - α_<1b> - <2+ substym phossection_ phossectration-clon <closem ploction_ phossection_ <亚型增加Ca^<2+>对收缩的敏感性。

项目成果

N.Kokubu,M.Satoh,I.Takayanagi: "Contractile responses and movements induced by α1-adrenoceptor stimulant,norepinephrine,in rabbit iris dilator muscle" General Pharmacology. 24. 1541-1545 (1993)

N. Kokubu、M. Satoh、I. Takayanagi：“α1-肾上腺素受体兴奋剂、去甲肾上腺素在兔虹膜扩张器肌肉中引起的收缩反应和运动”普通药理学 24. 1541-1545 (1993)。

萩原政彦,紺谷仁,佐藤光利,重信弘毅,高柳一成,田中光,他: "薬学生のための 薬理学実験書" 広川書店, 166 (1994)

Masahiko Hagiwara、Hitoshi Kontani、Mitsutoshi Sato、Hiroki Shigenobu、Kazunari Takayanagi、Hikaru Tanaka 等：“药学学生药理学实验书”广川书店，166（1994）

M.Satoh,N.Kokubu,I.Takayanagi: "Chloroethylclonidine discriminates between α1A-and α1B-adrenoceptors in the presence of guanosine 5'-triphosphate in rabbit thoracic aorta" Japanese J.Pharmacology. 63. 1-8 (1993)

M.Satoh、N.Kokubu、I.Takayanagi：“兔胸主动脉中存在 5-三磷酸鸟苷时，氯乙基可乐定对 α1A- 和 α1B-肾上腺素受体的区别”，Japan J.Pharmacology 63. 1-8 (1993)。

高柳一成,佐藤光利,小池勝夫: "単離平滑筋細胞における薬物受容体(総説)" 日薬理誌. 101. 111-122 (1993)

Kazunari Takayanagi、Mitsutoshi Sato、Katsuo Koike：“分离平滑肌细胞中的药物受体（评论）”日本药理学杂志 101. 111-122 (1993)

高柳一成,木沢靖夫,小池勝夫,向後博司,紺谷仁,佐藤光利,他: "解剖生理学マニュアル" 南山堂, 122 (1994)

Kazunari Takayanagi、Yasuo Kizawa、Katsuo Koike、Hiroshi Kogo、Hitoshi Kontani、Mitsutoshi Sato 等：《解剖学和生理学手册》Nanzando，122 (1994)