受容体を介した平滑筋収縮におけるCa^<2+>感受性増強機構と細胞内情報伝達系の研究

受体介导的平滑肌收缩中Ca^2+敏感性增强机制及细胞内信号转导系统研究

基本信息

批准号：
06772154
负责人：
佐藤光利
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

受容体を介したCa^<2+>感受性調節機構に関与する細胞内情報伝達系研究の一環として、α_1-アドレナリン受容体サブタイプ(α_<1A>およびα_<1B>)を介した収縮におけるCa^<2+>感受性増加機構を明らかにした。本年度は特に血管平滑筋に焦点をしぼって実験を行った。1.家兎胸部大動脈摘出切片を用いた細胞内Ca^<2+>濃度の測定および収縮実験細胞内Ca^<2+>濃度([Ca^<2+>]i)と収縮張力との関係をfura-2/AMを取り込ませた標本を用いて調べた。完全活性薬のノルエピネフリン(NE)および部分活性薬のクロニジン(Clon)で[Ca^<2+>]i(R340/380)と張力の間にはそれぞれ直線性が得られ、収縮に対するCa^<2+>利用率はNEよりもClonの方が大きかった。さらに、クロロエチルクロニジン処理標本(α_<1A>-受容体のみが存在する標本)ではNEのCa^<2+>利用率は未処理標本に比べ有意に大きかった。ミオシン軽鎖キナーゼ阻害薬のKT5926(10^<-5>M)およびK252a(10^<-6>M)はClon(3×10^<-6>M)よりもNE(3×10^<-8>M)の収縮を強く抑制した。クロロエチルクロニジン処理標本ではKT5926およびK252aによる抑制は未処理標本と比較して有意に小さかった。2,ミオシン軽鎖のリン酸化量の測定NE(10^<-5>M)によって45.2%のミオシン軽鎖がリン酸化され、一方Clon(10^<-4>M)は24.8%のミオシン軽鎖がリン酸化され、完全活性薬の方がリン酸化量が多かった。これらの結果より、NEはα_<1A>-およびα_<1B>-受容体サブタイプを介してミオシン軽鎖のリン酸化に依存しない経路とミオシン軽鎖のリン酸化に依存した経路の両方を活性化して収縮に対するCa^<2+>感受性増加を起こすのに対し、Clonは主にα_<1A>-受容体サブタイプを介してミオシン軽鎖のリン酸化に依存しない調節経路をより活性化して収縮に対するCa^<2+>感受性増加を起こしていることを明らかにした。

作为我们对参与受体介导的Ca^2+敏感性调节机制的细胞内信号转导系统研究的一部分，我们研究了对Ca^2+敏感性增加的机制。今年，我们的实验重点是血管平滑肌。 1. 兔胸主动脉离体切片细胞内Ca^<2+>浓度的测定及收缩实验细胞内Ca^<2+>浓度([Ca^<2+>]i)与收缩张力的关系研究使用装载有fura-2/AM的样本。对于去甲肾上腺素（NE）（一种完全活性的药物）和可乐定（Clon）（一种部分活性的药物），在[Ca^2+]i（R340/380）和张力与Ca^<2+>之间获得线性关系Clon的利用率高于NE。此外，在氯乙基可乐定处理的样本(仅存在α_ 1A -受体的样本)中，NE的Ca ^ 2+ 利用率显着高于未处理的样本。肌球蛋白轻链激酶抑制剂 KT5926 (10^<-5>M) 和 K252a (10^<-6>M) 比 NE (3×10^<-6>M) 比 Clon (3×10^ <-6>M)。-8>M)收缩被强烈抑制。与未处理的样本相比，经氯乙基可乐定处理的样本中 KT5926 和 K252a 的抑制显着较小。 2.肌球蛋白轻链磷酸化量的测定NE(10^-5M)磷酸化45.2％的肌球蛋白轻链，而Clon(10^-4M)磷酸化24.8％的肌球蛋白轻链。磷酸化，并且完全活性的药物具有更高的磷酸化量。这些结果表明，NE 通过 α_<1A>- 和 α_<1B>- 受体亚型对抗收缩，激活肌球蛋白轻链磷酸化非依赖性和肌球蛋白轻链磷酸化依赖性途径。而Clon主要通过α_<1A>-受体亚型激活肌球蛋白轻链的磷酸化独立调节途径，以增加Ca^<2+>对收缩的敏感性。