膀胱平滑筋細胞の収縮制御機構の解明に関する研究

膀胱平滑肌细胞收缩控制机制阐明的研究

• 批准号: 08671827
• 负责人: 福本 裕二
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671827/
• 关键词: 膀胱平滑筋; 細胞培養; ムスカリン受容体; 受容体サブタイプ; 抗コリン剤; アセチルコリン

1.家兎膀胱平滑筋細胞を用いてムスカリン受容体のサブタイプによる膀胱平滑筋収縮機構について検討した。2.SDラットの膀胱を摘出して粘膜除去後、平滑筋組織を細切し0.03%コラゲナーゼを含むPBSにて平滑筋細胞を遊離させ、これをMEM培地(10%FBS,100U/mlペニシリン,100μg/mlストレプトマイシン添加)に移しCO_2インキュベータ-(本予算で購入)内で37℃、10%CO_2環境下で培養した。固着細胞を0.05%トリプシンで処理し、継代培養して3-4代後に実験に使用した。細胞のviabilityはtrypan blueにより、平滑筋細胞の同定は平滑筋αアクチンにたいするモノクローナル抗体を用いてimmunoblotting法にて行った。膀胱平滑筋細胞の収縮反応は250μl細胞浮遊液に250μlの薬剤(KCl,acetylcholine)を含んだ溶液を加えて攪拌し、60秒間incubationして25%glutaraldehydeを加えて反応を停止させて、倒立顕微鏡にて細胞長の変化を観察した。ムスカリン受容体のサブタイプのantagonists(pirenzepine(M1),methoctoramine(M2),4-DAMP(M3))は約15分間前処置してacetylcholineによる収縮反応の変化を観察した。3.この方法により得られた細胞のviabilityは約75%であり、ほとんどすべての細胞に平滑筋αアクチンが検出され、平滑筋細胞であることが同定された。KClおよびacetylcholineにより平滑筋細胞は用量依存生に収縮反応を示し、最大収縮率はともに約30%であった。ムスカリン受容体のサブタイプのantagonistの前処置はいずれも用量依存生にacetylcholineによる収縮を抑制したが、そのpA_2値によるそれぞれの薬剤の作用強度は4-DAMP>>methoctoramine≧pirenzepineの順であった。4.以上の結果より家兎膀胱平滑筋細胞にはいずれのムスカリン受容体のサブタイプも存在するが、その収縮に関係するサブタイプはM3であることが確認された。またこの細胞単離法は簡便であり、今後単一細胞を用いての細胞内情報伝達機構などの解明に有用であることが示唆された。

1。我们使用家族兔子平滑肌细胞使用毛素受体的亚型检查了膀胱平滑肌收缩机制。 2。去除SD大鼠的膀胱并去除粘膜，将平滑肌组织切碎，并用含有0.03％胶原酶的PBS释放平滑肌细胞，这是MEM培养基（10％FBS，100U/ML，100U/ML/ML青霉素，转移至100μg/ml链霉素），并在37°C和10％CO_2环境中培养Co_2孵化器 - （以该预算购买）。联合细胞用0.05％的胰蛋白酶处理，在依次培养中，用于3-4S后进行实验。细胞活力是通过锥虫蓝进行的，并使用用于平滑肌α肌动蛋白的单克隆抗体鉴定平滑肌细胞的鉴定。膀胱平滑肌细胞的收缩反应为250μl细胞浮动溶液，并加入含有250μl的溶液（KCL，乙酰胆碱），搅拌60秒，添加25％的戊二醛并停止反应。细胞长度。毒素受体亚型型拮抗剂（Pirenzepine（M1），甲氧氨胺（M2），4-DAMP（M3））观察到乙酰胆碱的收缩反应变化约15分钟。 3。通过该方法获得的细胞的生存能力约为75％，几乎所有细胞都检测到平滑肌α肌动蛋白，并且可以确定它是平滑肌细胞。 KCL和乙酰胆碱在收缩反应中显示出平滑肌细胞，最大收缩率约为30％。墨斯林的亚型亚型亚型拮抗剂的预处理是全依赖性的，但是乙酰胆碱的收缩被抑制了，但是每种药物通过PA_2值的作用强度为4-DAMP >>甲氧氨氨氨胺pirenzepine。 4。从上述结果中，已经证实，兔膀胱平滑肌细胞也为每个毒素受体具有亚型，但与收缩有关的亚型为M3。据建议，这种细胞隔离方法很简单，对于将来使用单个细胞阐明细胞内信息传输机制非常有用。