レトロポゾンを利用した新たな突然変異体作成法の開発

开发利用反座子创建突变体的新方法

基本信息

批准号：
05760007
负责人：
吉岡泰
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05760007/
关键词：
レトロポゾン SINE 植物染色体

项目摘要

すでにin vitroでは転写されることがわかっているクローンを含む合計3つのTS familyのクローンをAgrobacterium tumefaciensを介してArabidopsis thalianaの染色体DNA上に導入し、染色体DNA上にTS familyを持つ形質転換植物を合計16系統作成した。これらの植物内でTS familyの転移が起こっているか否かをサザンハイブリダイゼーションおよびサザンハイブリダイゼーションよりもさらに高感度なインバース PCR法によって調べたが、いずれの形質転換植物体においてもTS familyの転移は検出されなかった。タバコや、イネにおいて内在性のレトロポゾンが植物細胞をカルス化さすることが報告されているので、さらに一系統の形質転換植物については、自家受粉して得られた第2代の植物の一部の根をカルス化しTS familyの転移が起こっているかをインバースPCR法によって調べた。しかし、この植物においてもTS familyの転移は検出されなかった。TS familyが転移するためにはそれに先だってTS family転写されなければならない。そこで、一系統の形質転換植物については、染色体DNA上に存在するTS familyが実際に転写されているかどうかをノザンブロット解析によって調べた。しかし、in vitroで転写されているTS familyを染色体上に導入したにもかかわらず、転写産物は検出されなかった。現在、TS familyの転写が、TS familyが存在する染色体上の位置に依存している可能性を考え、他の形質転換植物についてもTS familyが転写されているか否かを解析している。

通过根癌农杆菌将总共三个TS家族克隆（包括已知在体外转录的克隆）引入到拟南芥染色体DNA上，并创建了染色体DNA上带有TS家族的转化植物，总共16个品系。创建的。我们通过Southern杂交和反向PCR（比Southern杂交更灵敏）研究了这些植物中是否发生了TS家族转移，但我们发现在任何转化植物中均未检测到TS家族转移。据报道，内源性逆转录子会导致烟草和水稻植物细胞中愈伤组织的形成，我们通过使用反向PCR将根转化为愈伤组织来研究是否发生了TS家族的转移。然而，在该植物中也没有检测到 TS 家族的转移。在 TS 家族能够转移之前，TS 家族必须被转录。因此，对于转化植物的一个品系，我们通过 Northern 印迹分析研究了染色体 DNA 上存在的 TS 家族是否确实被转录。然而，尽管将体外转录的TS家族引入到染色体上，却没有检测到转录本。我们目前正在分析TS家族是否在其他转化植物中转录，考虑到TS家族的转录可能取决于TS家族的染色体位置。