細胞がん化にともなう細胞骨格異常に作動する蛋白質キナーゼの同定

鉴定作用于与细胞癌变相关的细胞骨架异常的蛋白激酶

基本信息

批准号：
04152148
负责人：
稲垣昌樹
金额：
$ 2.5万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Institute of Gerontology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

我々の作成した4種のリン酸化中間径フィラメント蛋白質特異抗体で,培養がん細胞を染色し,がん細胞増殖や形態異常に伴って生じる中間径フィラメントの構築変化に果たすリン酸化反応の役割を可視化して解析し以下の知見を得た。1).本年度の研究により,in vivo中間径フィラメントキナーゼの1つとしてcdc2キナーゼを同定したとともに,cdc2キナーゼの簡易大量精製法を確立した。2).精製cdc2キナーゼを用いて中間径フィラメント蛋白質ビメンチン,デスミン,グリア酸性蛋白質の機能に果たすcdc2キナーゼの役割を明らかにするとともにその機能リン酸化部位を同定した。3).同定したフィラメント蛋白質のリン酸化部位解析結果に基づいて種々の合成ペプチドを作製し,cdc2キナーゼの基質認識性について検討を加えた。cdc2キナーゼは1次構造上S/TPXR,S/T〓,S/TXXRをとるアミノ酸配列中のセリン残基またはスレオニン残基をリン酸化する。4).cdc2キナーゼはp34^<cdc2>とp62サイクリンとのcomplexよりなる。このcomplexに強く結合することが知られている蛋白質にp13^<suc1>蛋白質があるが,この蛋白質のcdc2キナーゼ活性に与える影響については不明のままとなってきた。本年度の研究で,我々はp13^<suc1>蛋白質が,cdc2キナーゼに結合すると,cdc2キナーゼの中間径フィラメントキナーゼとしての活性が特異的に著しく阻害されることを明らかにした。

我们使用我们创建的四种磷酸化中间丝蛋白特异性抗体对培养的癌细胞进行染色，并研究磷酸化反应在癌细胞增殖和形态异常时发生的中间丝结构变化中的作用，并对结果进行可视化和分析。并获得以下结果。 1）通过今年的研究，我们确定CDC2激酶是体内中间丝激酶之一，并建立了一种简单的CDC2激酶大规模纯化方法。 2）利用纯化的CDC2激酶，我们阐明了CDC2激酶在中间丝蛋白波形蛋白、结蛋白和胶质酸性蛋白功能中的作用，并鉴定了它们的功能磷酸化位点。 3).基于对已鉴定的丝蛋白磷酸化位点的分析，制备了各种合成肽并研究了CDC2激酶对它们的底物识别。 CDC2 激酶磷酸化一级结构为 S/TPXR、S/T〓或 S/TXXR 的氨基酸序列中的丝氨酸或苏氨酸残基。 4).cdc2激酶由p34^<cdc2>和p62细胞周期蛋白的复合物组成。已知 p13^<suc1> 蛋白与该复合物强烈结合，但该蛋白对 CDC2 激酶活性的影响仍不清楚。在今年的研究中，我们发现，当p13^<suc1>蛋白与CDC2激酶结合时，它作为中间丝激酶特异性且显着地抑制CDC2激酶的活性。