卵巣癌細胞における薬剤耐性克服薬の新規開発とその機能

克服卵巢癌细胞耐药性的药物新进展及其功能

基本信息

批准号：
04152058
负责人：
日高弘義
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

卵巣癌の化学療法では薬剤耐性が大きな障害となっており、P糖蛋白やグルタチオンSトランスフェラーゼ(GST)が耐性のメカニズムに関わるとされている。新規開発薬剤W-77がGSTと結合するという事実から我々は、W-77とアドリアマイシン(ADR)耐性との関わりを以下の方法を用いて研究した。ドラッグアフィニティーカラムクロマトグラフィーを用い、W-77とGSTとの結合について調べた。W-77のGST活性抑制効果を吸光度を用いて測定した。卵巣癌耐性株NOS2、NOS3およびADR耐性の細胞株NOS2AR、NOS3ARを確立し、MDR1とGSTの発現を調べた。MTTアッセイでW-77とベラパミリによる癌細胞のADRに対する感受性の変化を測定し比較した。^<14>C-ADRを用い、細胞内のADRの量への薬剤の影響を調べた。[結果]W-77は、直接GSTと強く結合した。W-77は、下拮抗的にGSTの活性を阻害し、1mMグルタチオン、1mMCDNB存在下300μMで47.3%に低下させた。P-糖蛋白とGSTは、耐性株で過剰発現した。ADR感受性試験ではNOS2に対し67.8倍の耐性を持つNOS2ARは10μMW-77の投与により10.6倍に低下するが、10μMベラパミルでは17.5倍であった。NOS3に対し18.8倍の耐性を持つNOS3ARは、10μMW-77の投与により6.0倍に低下するが、10μMベラパミルでは9.6倍であった。耐性株の細胞内ADR量は10μMW-77は10μMベラパミルと共にNOS2ARでは約1.5倍、NOS3ARでは約2.2倍に増加させた。[結語]以上より、W-77は、P-糖蛋白とGSTの両方の活性を阻害することにより耐性を克服することが判明し、それはP-糖蛋白の活性阻害剤であるベラパミルより有効であった。

耐药性是卵巢癌化疗的主要障碍，P-糖蛋白和谷胱甘肽S-转移酶（GST）被认为参与了耐药机制。基于新开发的药物W-77与GST结合的事实，我们使用以下方法研究了W-77与阿霉素（ADR）耐药性之间的关系。使用药物亲和柱色谱法研究了 W-77 和 GST 之间的结合。使用吸光度测量 W-77 对 GST 活性的抑制作用。我们建立了卵巢癌耐药细胞系NOS2和NOS3以及ADR耐药细胞系NOS2AR和NOS3AR，并检测了MDR1和GST的表达。使用 MTT 法测量并比较癌细胞对 W-77 和维拉帕米的 ADR 敏感性的变化。 ^<14>利用C-ADR，我们研究了药物对细胞中ADR量的影响。 [结果]W-77与GST直接相关。 W-77 以竞争性方式抑制 GST 活性，在 1mM 谷胱甘肽和 1mMCDNB 存在的情况下，在 300 μM 时将其降低至 47.3%。 P-糖蛋白和GST 在耐药菌株中过度表达。在ADR药敏试验中，NOS2AR的耐药性是NOS2的67.8倍，给予10μMW-77后，其耐药性降低至10.6倍，但给予10μM维拉帕米时，其耐药性提高了17.5倍。 NOS3AR对NOS3的耐药性是18.8倍，通过施用10μMW-77将其降低至6.0倍，但对10μM维拉帕米的耐药性是9.6倍。在耐药菌株中，10μMW-77和10μM维拉帕米使NOS2AR的细胞内ADR量增加约1.5倍，使NOS3AR增加约2.2倍。 [结论] 综上所述，W-77通过抑制P-糖蛋白和GST的活性来克服耐药性，且比现有的P-糖蛋白活性抑制剂维拉帕米更有效。