癌細胞のカルモデュリン依存性蛋白リン酸化反応に関する分子薬理学的研究

癌细胞中钙调蛋白依赖性蛋白磷酸化的分子药理学研究

基本信息

批准号：
63015029
负责人：
日高弘義
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

腫瘍細胞における蛋白質リン酸化反応の制御機構について解析を進めた。鶏胎児線維芽細胞をレトロウイルスでトランスフォームして得られたP130^<fps>とP60^<src>はいづれもチロシンキナーゼ活性を有し、いづれもP36と呼ばれる蛋白質をリン酸化する。カルシウム結合蛋質S-100及びカルモデュリンはこの2つのキナーゼ活性を抑制する事を見い出し、腫瘍細胞におけるチロシンリン酸化活性の制御機構の1つにカルシウム結合蛋白質カルモデュリン依存性蛋白質リン酸化酵素との連関を調べるため2つの新しいタイプの阻害剤を合成、発見した。1つはML-9でありカルモデュリン依存性ミオシン軽鎖キナーゼ(MLCK)のATP結合部位に作用して活性を阻害する薬物であり、一方はサイロキシン(T_4)でこれはMLCKのカルモデュリン結合部位に作用する。2つの阻害剤はいづれもin vivo,in vitroにおいてミオシン軽鎖のリン酸化を選択的に抑制し、サイロキシンアクィニティークロマトグラフィーにより簡便にMLCKが分離・精製される事を見い出した。またML-9はPDGF刺激によるDNA合成を低濃度で抑制し、細胞増殖へのミオシン軽鎖キナーゼの関与を示唆した。しかし今年度の計画にあった細胞周期を同調させた培養細胞におけるカルモデュリン依存性蛋白質リン酸化酵素の各周期における役割等は今後の課題として残されたが、ML-9の培養細胞における有用性が示され、サイロキシンアフィニティクロマトグラフィー法の確立等今後の課題に取り組むための手段・方法の有効性は充分に示された。

我们分析了肿瘤细胞中蛋白质磷酸化的控制机制。 P130^<fps>和P60^<src>都是通过逆转录病毒转化鸡胎儿成纤维细胞获得的，都具有酪氨酸激酶活性，并且都磷酸化一种称为P36的蛋白质。我们发现钙结合蛋白S-100和钙调蛋白抑制这两种激酶的活性，我们推测肿瘤细胞中控制酪氨酸磷酸化活性的机制之一是与钙结合蛋白钙调蛋白依赖性蛋白激酶的联系为了研究这一点，合成并发现了两种新型抑制剂。一种是ML-9，作用于钙调蛋白依赖性肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的ATP结合位点，抑制其活性；另一种是甲状腺素（T_4），作用于钙调蛋白依赖性肌球蛋白轻链激酶（MLCK）的ATP结合位点，抑制其活性。 MLCK 网站。我们发现这两种抑制剂在体内和体外都选择性抑制肌球蛋白轻链的磷酸化，并且MLCK可以很容易地通过甲状腺素敏锐度色谱法分离和纯化。此外，ML-9 在低浓度下抑制 PDGF 刺激的 DNA 合成，表明肌球蛋白轻链激酶参与细胞增殖。然而，按照今年的计划，钙调蛋白依赖性蛋白激酶在培养细胞中与细胞周期同步的每个周期中的作用仍然是一个未来的问题，但 ML-9 在培养细胞中的有用性仍然是手段的有效性。甲状腺素亲和层析的建立等解决未来问题的方法已得到充分论证。