Cキナーゼ活性の新規化合物による分子制御機構の細胞生物学的解析

使用新化合物对 C-激酶活性的分子调节机制进行细胞生物学分析

基本信息

批准号：
62614512
负责人：
日高弘義
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62614512/
关键词：
Cキナーゼ CDNAクローンモノクローナル抗体免疫組織化学

项目摘要

運動系における情報の受容変換機構において最も重要な酵素の一と目されるCキナーゼの役割を分子生物学, 分子免疫学, 分子薬理学の3つのアプローチにより検討した. まずウサギ脳より精製したCキナーゼをもとに, 都立臨床研の鈴木部長らと共同でCキナーゼのCDNAを解析し, その全一次構造を解明した. またこのクローニングの課程でCキナーゼにはα, β, γ, δの4種の分子種が存在することを発見した. 次にこのCキナーゼの4種の遺伝子が, ハイドロキシアペタイトクロマトグラフィーにより分離されたI型, II型, III型のどのCキナーゼアイソザイムをコードするのかを明かにするため, それぞれのアイソザイムを特異的に認識するモノクロナール抗体, MC-1a, MC-2a, MC-3aを作製し得た. これらの抗体を用いて中枢神経系の免疫組織化学的検索を行ったところ, I型Cキナーゼは小脳のプルキニエ細胞, 海馬の錐体細胞等に, II型は小脳の顆粒細胞等に, III型は白質のオリゴデンドログリア細胞等に特に豊富に分布することが判明した. また脾臓や造血組織にはI型は存在せず, II型及びIII型のみが分布することが発見された. これらの結果とノーザンブロッティングによるCキナーゼのmRNAの臓器特異的発現の検討から, I型はδ, II型はα及びβ, III型はγによりコードされていると考えられた. また各抗体のエピトープ分析の結果, これらのモノクローナル抗体はいずれもCキナーゼの調節部位を認識していることが明かとなった.

我们使用分子生物学、分子免疫学和分子药理学三种方法研究了 C 激酶的作用，C 激酶被认为是运动系统中信息接收和转导机制中最重要的酶之一。基于该激酶，我们与东京都临床研究所铃木所长合作分析了C激酶的cDNA，并阐明了其整个一级结构。此外，在该克隆过程中，C激酶具有α、β。 , γ,我们发现δ有四种分子种类。接下来，我们接下来确定这四种C激酶基因是否编码I型、II型或III型C-激酶同工酶，并通过羟基磷灰石色谱分离以澄清是否。在这种情况下，我们能够创建单克隆抗体 MC-1a、MC-2a 和 MC-3a，专门识别每种同工酶。使用这些抗体对中枢神经系统进行的免疫组织化学搜索显示，在小脑的浦肯野细胞和海马的锥体细胞中发现了 I 型 C 激酶，在小脑的颗粒细胞中发现了 II 型 C 激酶，在颗粒细胞中发现了 III 型 C 激酶。在小脑中发现，脾脏和造血组织中不存在I型，只有II型和III型分布于脾脏和造血组织中。基于这些结果以及通过Northern印迹检查C激酶mRNA的器官特异性表达，得出结论：I型由δ编码，II型由α和β编码，III型由γ编码。结果表明，所有这些单克隆抗体都能识别 C 激酶的调节位点。