単離前庭神経内側核ニュ-ロンにおけるグルタミン酸レセプタ-の証明

分离前庭内侧核神经元中谷氨酸受体的演示

• 批准号: 03670100
• 负责人: 笹 征史
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1991
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1991 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670100/
• 关键词: グルタミン酸レセプタ-; 前庭神経内側核; 単離ニュ-ロン; パッチクランプ法; NMDA; AMPA; カイニン酸; キスカル酸

前庭神経内側核は末梢前庭器より入力を受け、腿運動核に投射し、前庭・眼反射を構成する主要な核である。我々のこれまでの研究から、一次求心神経からこの前庭神経内側核ニュ-ロンへの伝達物質はグルタミン酸であると考えられ、本研究ではこのニュ-ロンにグルタミン酸レセプタ-が存在することをパッチクランプ法を用いて証明することを目的とした。ラット延髄スライスを作製、前庭神経内側核を摘出し、トリプシン処理にてニュ-ロンを単離した。薬物はすべてピペット内へ充填し、記録ニュ-ロンより約100μm離れた位置から噴射により直接ニュ-ロンに投与した。このニュ-ロンはセルアタッチおよびホ-ルセル記録にて規則正しい自発発火を示した。電流固定下にグルタミン酸を投与すると発火の亢進がみられ、この反応はGDEEにより拮抗された。-70mVに電位を固定し、グルタミン酸(10〜100μM)を投与すると用量依存性の内向き電流が得られた。グルタミン酸による内向き電流の平衡電位は約-30mVであった。AMPA(10〜100μM)キスカル酸(100μM)およびカイニン(10〜100μM)によってもグルタミン酸によるものと同様の内向き電流が得られ、その平衡電位は約-30mVであった。また100μMのNMDAによっても内向き電流が得られ、この平衡電位は約-10mVであった。NMDAレセプタ-遮断薬MK801を投与しておいてNMDAを投与した場合にはNMDAによる内向き電流は遮断された。一方、グルタミン酸による内向き電流はCNQXにより拮抗された。以上の結果から、前庭神経内側核ニュ-ロンにはグルタミン酸レセプタ-が存在し、そのサブタイプであるNMDAレセプタ-と非NMDAレセプタ-(AMPAーキスカル酸ーカイニン酸レセプタ-)の2者が存在すると考えられる。

内侧前庭神经核从周围的前庭器官接收输入，并将其投射到股骨运动核上，并且是构成前庭和眼反射的主要核。从我们以前的研究中，可以认为从主要传入到该内侧前庭核的发射机是谷氨酸，在这项研究中，我们旨在使用斑块夹法证明在此NURON中存在谷氨酸受体的存在。制备大鼠髓质切片，去除内侧前庭神经核，并通过胰蛋白酶消除神经元分离神经元。所有药物都被填充到移液管中，并通过从距记录神经元约100μM的位置注射直接给予神经元。该神经元在细胞附着和恐怖细胞记录中表现出定期的自发射击。在固定电流下的谷氨酸给药增加了发射，该反应被GDEE拮抗。电势固定为-70 mV，谷氨酸（10-100μm）施用以获得剂量依赖性的内电流。由于谷氨酸引起的内向电流的平衡电位约为-30 mV。 AMPA（10-100μM），Kiscalic Acid（100μM）和Kainin（10-100μM）也产生了类似于谷氨酸的内向电流，其平衡电位约为-30 mV。还使用100μMNMDA获得内向电流，平衡电位约为-10 mV。当给予NMDA受体阻滞剂MK801并施用NMDA时，NMDA引起的内部电流被阻断。同时，谷氨酸引起的内电流被CNQX拮抗。基于上述结果，人们认为内侧前庭神经核中有一个谷氨酸受体，并且有两个亚型：NMDA受体和非NMDA受体（Ampa-Kiscalate kainic kainic Acid受体）。

项目成果

N.Sakai: "Effects of LーthreoーDOPS,a noradrenaline precursor,on the longーterm potentiation in the rat hippocampal mossy fiberーCa3 region" Brain Research. 567. 267-273 (1991)

N.Sakai：“去甲肾上腺素前体 L-threo-DOPS 对大鼠海马苔藓纤维 Ca3 区域长期增强的影响”《大脑研究》567. 267-273 (1991)。