臓器細胞へのがん遺伝子導入による生体での発癌機構の解明

通过将癌基因引入器官细胞来阐明生物体的致癌机制

基本信息

批准号：
03152075
负责人：
金田安史
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03152075/
关键词：
HVJーliposome法遺伝子導入がん遺伝子発癌

项目摘要

生体の臓器に直接癌遺伝子を導入し発現させ,その時におこる変化を分子レベルでとらえ,臓器での発癌・癌抑制機構の解明を目的とし以下の研究を行なった。方法は既に報告したHVJーliposome法で,導入遺伝子は発癌ウイルスのDNAを用いた。(1)ヒトB型肝炎ウイルス(HBV)のS遺伝子を成育ラットの肝臓に導入した。MajorSとLargeS DNAを導入しβーactin promoterのもとで発現させると,抗原は肝細胞表面に出現した。導入4日目以降,S抗原に対する抗体が血中に分泌された。肝臓の病理変化は1週間後には肝細胞の空胞変性,2週後には肝小葉内のリンパ球浸潤と巣状壊死が認められた。4週後にはグリソン鞘炎の像がみられた。これはヒトB型肝炎の急性期の像とほほ一致するものなので,肝炎後の組織修復とその後におこる変化を現在経時的に観察している。(2)SV40のlargeT抗原遺伝子(SVT)の導入と発現SVTをβーactin promoterのもとで強力に発現させると培養細胞を容易に形質転換できる。このDNAをHVJーliposome法によりラットの門脈或いは肝臓被膜下に注入した。導入DNAは肝細胞のゲノムDNAには組み込まれないが肝細胞の核内に約10日間在存する。経時的に肝臓の凍結切片を作製し,T抗原の発現と肝細胞の変化を観察した。1〜2日目には一部の肝細胞の核にT抗原の発現を認めた。3〜5日目には肝細胞の核が崩壊し細胞質内に飛散し,正常な形態を保つ核は少なくなる。5〜10日目には,壊死に陥った部位がいくつか認められた。次に部分肝切除を施行し,残存肝小葉にSVTを導入した。施行した5例のうち2例に2週後の肝臓に小結節が数個認められ,3週後にはそのうちの1例に0.5×1cmのTumorが形成された。

我们进行了以下研究，目的是通过将癌基因直接导入并表达到活体器官中，并观察分子水平上发生的变化，阐明器官的致癌和抑制癌症的机制。所使用的方法是先前报道的HVJ-脂质体方法，并且使用致癌病毒的DNA作为导入基因。 (1)将人乙型肝炎病毒(HBV)的S基因导入成年大鼠肝脏。当MajorS和LargeS DNA被引入并在β-肌动蛋白启动子下表达时，抗原出现在肝细胞表面。从引入后第4天开始，针对S抗原的抗体就分泌到血液中。肝脏病理变化包括1周后肝细胞空泡变性，2周后肝小叶内淋巴细胞浸润和局灶性坏死。四个星期后，出现了格里森鞘炎的迹象。这与人类乙型肝炎急性期的情况非常吻合，因此我们目前正在观察肝炎后的组织修复以及此后随时间推移发生的变化。 (2)SV40largeT抗原基因(SVT)的导入和表达当SVT在β-肌动蛋白启动子下强烈表达时，培养的细胞可以容易地转化。使用 HVJ 脂质体方法将该 DNA 注射到大鼠的门静脉或肝被膜下。引入的DNA不整合到肝细胞的基因组DNA中，而是在肝细胞的细胞核中保留约10天。随着时间的推移制备肝脏冰冻切片以观察T抗原表达和肝细胞的变化。第1天和第2天，在一些肝细胞的细胞核中观察到T抗原表达。第3至5天，肝细胞的细胞核解体并散入细胞质，保持正常形态的细胞核数量减少。第5至10天，观察到一些坏死区域。然后，进行部分肝切除术，并将 SVT 引入剩余的肝小叶。 5例患者中，2例术后2周发现肝脏出现多个小结节，3周后其中1例形成0.5×1cm的肿瘤。