導入遺伝子の長期発現増強法を用いた転移性癌の遺伝子治療法の開発

利用转基因的长期表达增强开发转移性癌症的基因疗法

基本信息

批准号：
13218069
负责人：
金田安史
金额：
$ 25.86万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

癌抗原関連遺伝子が同定されていない癌に対し、PEGや電気穿孔法を用いた癌細胞と樹状細胞の融合法が抗腫瘍免疫誘導に有効であること報告されている。しかし、不活性化HVJはそれよりも再現性高くまた高効率に(PEGの数十倍)融合させることが可能であった。融合細胞をマウス皮下に1週間隔で2度免疫し10日後に脾細胞を取り出し、癌細胞で刺激したときに分泌されるIL-12を測定した。樹状細胞と癌細胞の混合したもので免疫したものよりも高いサイトカイン分泌を得た。融合細胞だけをソーティングしてもしなくてもサイトカイン分泌は変わらなかった。この融合細胞により癌の抗原の多くが提示されると考えられるが、その後でNaive T細胞を成熟させて細胞傷害性T細胞として機能させるため、アジュバンド作用のある物質が必要である。そこでCpGオリゴヌクレオチドを用いることにした。CpGオリゴヌクレオチドを融合細胞と混合したところ、CD80,CD86,MHC-class IIの発現でみられる樹状細胞の成熟がさらに増強され、IL-12,TNF-alphaの分泌もCpGオリゴヌクレオチドを用いない場合の2倍以上であった。そこでX線照射したマウスメラノーマとマウス樹状細胞の融合細胞をCpGオリゴヌクレオチドと混合してマウスに2度投与し、10日後に脾細胞を取り出してメラノーマに対する細胞傷害性T細胞の活性を測定したところ、CpGオリゴヌクレオチドの併用により著しい活性の増強をみた。しかしこの細胞傷害性T細胞は同じ系統のマウス異なる腫瘍であるリンフォーマ細胞EL4には反応しなかった。免疫後に腫瘍を移植したところこの方法により癌生着の完全抑制、高いマウス生存率(80%)が得られた。マウス腎癌細胞RENCAを用いた場合も同様のワクチン効果が得られた。腫瘍ができなかったマウスに再度同じ腫瘍を移植しても完全に拒絶がおこった。

据报道，使用PEG或电穿孔融合癌细胞和树突状细胞可有效诱导针对尚未鉴定出癌症抗原相关基因的癌症的抗肿瘤免疫。然而，灭活的 HVJ 可以更重复地融合，并且效率更高（是 PEG 的几十倍）。每隔一周用融合细胞对小鼠进行皮下免疫两次，10天后取出脾细胞，测量癌细胞刺激时分泌的IL-12。与用树突状细胞和癌细胞的混合物免疫时相比，获得了更高的细胞因子分泌。无论是否仅对融合细胞进行分选，细胞因子的分泌都没有改变。许多癌症抗原被认为是由这些融合细胞呈递的，但需要具有佐剂作用的物质才能随后使幼稚 T 细胞成熟并使其发挥细胞毒性 T 细胞的功能。因此，我们决定使用CpG寡核苷酸。当CpG寡核苷酸与融合细胞混合时，在CD80、CD86和MHC-II类表达中观察到的树突状细胞的成熟进一步增强，并且在不使用CpG寡核苷酸的情况下也实现了IL-12和TNF-α的分泌。 CpG 寡核苷酸是案例的两倍多。因此，将经过X射线照射的小鼠黑色素瘤和小鼠树突状细胞的融合细胞与CpG寡核苷酸混合并给予小鼠两次。10天后，取出脾细胞并测量针对黑色素瘤的细胞毒性T细胞的活性。然而，CpG 寡核苷酸的联合使用显着增强了活性。然而，这些细胞毒性 T 细胞对淋巴瘤细胞 EL4 没有反应，淋巴瘤细胞 EL4 是来自同一品系的小鼠的不同肿瘤类型。当免疫后移植肿瘤时，这种方法完全抑制了癌症的植入，并提高了小鼠的存活率（80%）。当使用小鼠肾癌细胞RENCA时，获得了类似的疫苗效果。当将相同的肿瘤重新植入未长出肿瘤的小鼠体内时，会发生完全排斥反应。