制御性T細胞の抑制と腫瘍特異的な薬物送達を可能にするVirosomeの開発

开发病毒体以抑制调节性 T 细胞和肿瘤特异性药物输送

基本信息

批准号：
20015029
负责人：
金田安史
金额：
$ 6.14万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20015029/
关键词：
抗腫瘍免疫 HVJ 制御性T細胞 IL-12 癌治療標的導入生体適合性ポリマー

项目摘要

HVJ-Eはそれ自体が抗腫瘍免疫を活性化して抗腫瘍効果を発揮するが、なかでも樹状細胞に作用してIL-6を分泌させ制御性T細胞を抑制するできることは、他の免疫治療剤にはない特長である。IL-6産生にはHVJ-EのF蛋白質が関与する。一方、HVJ-EはInterferon-γの産生は直接促進せず、Effector T cellの増殖や活性化には直接作用しない。この能力が付与できれば、さらに強力な抗腫瘍効果が期待できる。そこでIL-12を表面に付加した高機能化HVJ-Eを作成し、CTL活性の増強を図ることを試みた。すでに報告し、特許化した方法に則って(Human Gene Ther. 2007, BBRC 2007、改変パラミクソウイルスおよびその作製方法WO2007/061141 A1)、HVJの膜蛋白のHNの欠失変異体(mutHN)に免疫グロブリンのFc領域を結合させ、これをもつFc-mutHN-HVJ-Eを作成する。マウスIL-12のp35,p40を遺伝子工学的に一本鎖にして、そのC末端にProtein-AのFc結合部分のZZ domainを付加する。培養細胞で大量に合成させて精製したIL-12-ZZをFc-mutHN-HVJ-Eに付加してIL-12-HVJ-Eを作成する。HVJ-Eの本来のレセプターへの結合を抑えるためintactHNはそのsiRNAをウイルス産生細胞に導入して欠損させる。このような方法によって作製したIL-12結合Virosomeは樹状細胞や脾細胞からInterferon-γを分泌させた。Interferon-α,-βやIL-6の産生能は保持していた。この高機能化HVJ-Eをメラノーマ腫瘍塊に直接投与する実験を行った。高機能化HVJ-Eでは100HAUの3回投与で、著明な抗腫瘍効果が認められ約30%のマウスで腫瘍が消失した。I1-12を結合させずに、HVJ-Eと混ぜ合わせて腫瘍塊に投与すると、腫瘍の消失は数%のマウスでしか起こらなかった。肺にメラノーマの転移結節をつくり、通常のHVJ-E, IL-12結合HVJ-Eを尾静脈より投与した。IL-12結合型HVJ-Eにより2週後の肺転移結節数は有意に減少した。マウスメラノーマにはIL-12受容体の発現が認められるという報告があり、抗腫瘍免疫の活性化以外に、腫瘍巣への標的化が可能になった可能性も示唆された。

HVJ-E本身会激活抗肿瘤免疫，并具有抗肿瘤作用，但可以对树突状细胞作用以分泌IL-6并抑制对照T细胞。 IL-6产生与HVJ-E的F蛋白有关。另一方面，HVJ-E不会直接促进干扰素-γ的产生，也不直接作用于效应T细胞的生长和激活。如果可以赋予这种能力，则可以预期具有更强大的抗肿瘤效果。因此，我们尝试创建一个高功能的HVJ-E，并在表面添加IL-12并增强CTL活性。根据已经报道的和专利的方法（HumanGene。2007，BBRC 2007，修改的Parmic源及其创建方法WO2007/061141 A1），HVJ的HN缺失HN。 fc-muthn-hvj-e。小鼠IL-12的p35和p40是遗传工程的，蛋白质A的FC结合部分的Zz结构域添加到末端C末端。通过合成大量培养细胞纯化的IL-12-ZZ被添加到FC-Muthn-HVJ-E中以创建IL-12-HVJ-E。 Intacthn将siRNA引入产生病毒的细胞，以减少与HVJ-E原始受体的结合。通过这种方法从树突状细胞和脾细胞中分泌的干扰素-γ制备的IL-12结合病毒体。保留干扰素-α，-a和IL-6。进行了实验以直接给予这种高功能的HVJ-E对黑色素瘤肿瘤。在高性能HVJ-E（100 Hau的三倍）中，识别出显着的抗肿瘤作用，并且肿瘤用大约30％的小鼠消失。当I1-12与HVJ-E混合并给予肿瘤时，肿瘤的消失仅发生在几个百分之几的小鼠中。黑色素瘤转移是在肺中产生的，并从尾静脉中施用普通的HVJ-E IL-12结合HVJ-E。 IL-12结合型HVJ-E两周后已显着减少肺转移节点的数量。据报道，小鼠黑色素瘤因IL-12受体的表达而被识别，这表明除了抗肿瘤免疫的激活外，还可以靶向肿瘤。