DNA複製反応の促進及び抑制のメカニズムと癌化

促进和抑制DNA复制反应和癌症形成的机制

基本信息

批准号：
03151025
负责人：
吉田松年
金额：
$ 13.31万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ln vitro複製系:SV40ミニ染色体を鋳型としてDNAポリメラ-ゼα・プライマ-ゼ複合体、DNAポリメラ-ゼδ、PCNA等を用いた複製再構成系を確立し、これを用いてヌクレオソ-ムの複製時における再分配の様式を詳細に検討し、複製後leading及びlagging両鎖に平等に分配される事を示した(花岡)。新規トポイソメラ-ゼII阻害剤ICRM193はこの系の複製最終段階である両鎖のdecatenation及びTer領域の複製を阻害した(安藤)。複製開始及びlagging鎖上での不連続DNA合成に際してprimerRNAを合成するプライマ-ゼの塩基配列特異性に関しては従来不明であったが、牛胸腺DNAポリメラ-ゼα・プライマ-ゼ複合体が特に効率良く複製を開始する領域を解析してみると、その部位にはパリンドロ-ム構造及びTCTCTTA(有賀らの見出したcーmycARSのcore配列)を含み、哺乳類クロマチン複製開始起点との関連が注目される(吉田)。SV40DNA複製系に於て必須であるT抗原の宿主細胞側のカウンタ-パ-トの候補の一つとして、T抗原と同様にDNAポリメラ-ゼαと結合するDNAヘリカ-ゼを同定した。今後の解析が期待される。癌遺伝子産物及び癌抑制遺伝子産物:oncoprotein及びantioncoproteinと複製との関連につき進展がみられた。B型肝炎virusXタンパクを大腸菌で過剰発現、精製して生化学的特質を検討したところ、ATP、特異なタンパク分解酵素と結合能を有し、一方、転写調節因子とも結合し種々の因子の細胞内濃度の調節機能が示唆された(小池)。RBタンパクの細胞内標的として、RB結合タンパクを入gt11libraryでスクリ-ニングし結合タンパクをcodeするクロ-ン4種を得た。その一つ、56KDaタンパクを精製した。その生化学特質に興味が持たれる。RBタンパクはcdk2キナ-ゼでリン酸化修飾され、細胞増殖周期の進行を調節するが、その詳細な分子機構の解明が進行中である(秋山)。

体外复制系统：以SV40微型染色体为模板，利用DNA聚合酶α/引物酶复合物、DNA聚合酶δ、PCNA等建立了复制重建系统，并用其生成核小体的模式进行了详细研究。复制过程中的重新分布，并表明它在复制后均匀地分布到前导链和滞后链（Hanaoka）。一种新型拓扑异构酶 II 抑制剂 ICRM193 抑制两条链的去连接和 Ter 区域的复制，这是该系统中复制的最后阶段 (Ando)。引物酶在复制起始和滞后链上不连续 DNA 合成过程中合成引物 RNA，其核苷酸序列特异性此前尚不清楚，但牛胸腺 DNA 聚合酶 α-引物酶复合物已被证明特别有效。对复制起始区域的分析表明，该区域包含回文结构和 TCTCTTA（Ariga 等人发现的 c-mycARS 的核心序列），并注意到其与哺乳动物染色质复制起始起点的关系（Yoshida）。我们鉴定出一种 DNA 解旋酶，它以与 T 抗原相同的方式与 DNA 聚合酶 α 结合，作为 T 抗原的宿主细胞对应物的候选者，T 抗原在 SV40 DNA 复制系统中至关重要。预计未来的分析。癌基因产物和抑癌基因产物：癌蛋白和阴离子蛋白与复制之间的关系已取得进展。当乙型肝炎病毒A的内部浓度调节功能被提出时（小池）。作为RB蛋白的胞内靶标，我们利用gt11文库筛选了RB结合蛋白，并获得了编码该结合蛋白的4个克隆。其中一种是 56KDa 的蛋白质，已被纯化。我对其生化特性感兴趣。 RB蛋白被CDK2激酶磷酸化和修饰，调节细胞增殖周期的进展，但详细的分子机制目前正在阐明（Akiyama）。