DNAプライマーゼ及びテロメラーゼを標的とする新規阻害物質のがん細胞増殖制御

使用针对 DNA 引物酶和端粒酶的新型抑制剂控制癌细胞增殖

基本信息

批准号：
09255219
负责人：
吉田松年
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究目的 DNAプライマーゼ及びテロメラーゼを分子標的とする新たな阻害剤を探索する。DNAプライマーゼは基質類似体ではRNAポリメラーゼも同時に阻害してしまい、特異的阻害は困難である。したがって基質とは構造が異なるスフィンゴシンは有望な候補である。テロメラーゼは、複製に際して短縮するクロマチンの末端テロメア構造を伸長して長さを確保するための逆転写酵素であり、正常組織には極めて低いが、がん細胞は一般に高活性を示す。従って、本酵素はがんと非がん部を鑑別するための有力な手段となり得ると同時に、がんに対する特異的増殖阻害剤の標的として有望である。成果スフィンゴシン及びその各種の誘導体を用いてDNAプライマーゼ阻害と細胞増殖抑制活性との相関を検討した。sphingosine,phyto-sphingosine,N,N'-dimethyl-sphingosineはDNAプライマーゼのin vitro反応を強く阻害し(Ki=1.5-3.0μM)、cis-sphingosineとdihydro-sphingosineは中程度の阻害を示し(Ki=10-15μM),C-2 ceramide,C-8 ceramide,ceramideは全く阻害しなかった。これらはプライマーゼ阻害の強さと比例してヒト白血病細胞HL60の増殖を阻害し、細胞はアポトーシスに陥った。スフィンゴシンによるDNAプライマーゼ阻害が細胞死の機構の一つであることが示唆された。又、DNAポリメラーゼβ阻害物質として極めて強い阻害活性を示す海洋性古細菌由来のエーテル脂質KN208を見い出した。KN208はヒト白血病細胞のDNAメチル化剤MMS感受性を増大させた。このことは、メチル化DNAの修復に関与するDNAポリメラーゼβを阻害することにより、薬剤感受性を高める可能性を示すものである。テロメラーゼに関しては阻害剤のスクリーニングを行った。テロメラーゼはラット腹水がん細胞(AH7974)の抽出物をゲルろ過カラムによりヌクレアーゼを除去し用いた。阻害物質は化学合成物質、天然物を中心として約15000種類をスクリーニングし、5種類の候補物質を得た。又、阻害の酵素特異性についてDNAポリメラーゼα、β、δ、ε、γ、HIV-RT、大腸菌DNAポリメラーゼI等の阻害と比較して検討した。

探索一种新的抑制剂，该抑制剂是研究目的的分子靶标DNA起初和恐怖主义酶。 DNA起初是类似底物的体，RNA聚合酶同时抑制，因此很难抑制特异性。因此，与底物不同的结构不同的葡萄糖是有前途的候选人。 Teromerase是一种反向副本 - 酶，可扩展染色质的末端角膜结构，该结构在重复中减少并确保长度，并且对于正常组织而言极低，但癌细胞通常显示出较高的活性。因此，该酶可以是区分癌症和非癌症的有力手段，并且是针对癌症的特定增殖抑制剂的有希望的靶标。使用所得的链氨醇和各种衍生物检查了DNA培养酶抑制与细胞生长抑制活性之间的相关性。鞘氨醇，植物 - 肾上腺素，N，N'-二甲基 - 闪氨酸受到强烈抑制（Ki =1.5-3.0μm），顺式 - 闪氨酸和二苯胺显示中等抑制（KI =10-15μm），C-2 Ceramide，C-2 Ceramide，C-2 Ceramide，C-2 Ceramide，C-2 Ceramide，CI -8神经酰胺，神经酰胺根本没有抑制。这些抑制了人类白血病细胞HL60的生长，与原始酶抑制的强度成比例，细胞凋亡。据认为，鞘氨酸抑制DNA培养酶是细胞死亡的机制之一。此外，我们发现了源自海洋古细菌的乙醚脂质kn208，该脂质的抑制作用极强，作为DNA聚合酶β抑制剂。 KN208增加了人类白血病细胞的DNA甲基化剂MMS敏感性。这表明通过抑制参与甲基化DNA恢复的DNA聚合酶β来提高药物敏感性的可能性。对于Ternomerase，筛选抑制剂。 Teromerase通过凝胶过滤柱除去了大鼠锚固癌细胞的提取物（AH7974）。筛选约15,000种类型的抑制剂，主要是化学合成物质和天然产物，并获得了五种类型的候选物质。另外，通过比较DNA聚合酶α，β，δ，δ，ε，γ，HIV-RT，Escherichia coli DNA聚合酶I等来检查抑制的酶特异性。