DNA組換えにおけるRuvA,B,Cタンパクの機能の解析

RuvA、B、C蛋白在DNA重组中的功能分析

基本信息

批准号：
03267205
负责人：
品川日出夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

大腸菌のruvA,ruvB,ruvC遺伝子は相同的組換えとDNA損傷の修復に関与していることが知られている。本年度はruvC遺伝子の構造解析と、制御様式を研究した。更にRuvA,RuvB,RuvCタンパクを精製し、相同的DNA組換えの中間体であるHolliday構造の種々のアナログを基質として、反応させ、組換え反応における機能を研究した。1.ruvC遺伝子は19KDaのタンパクをコ-ドし、SOS調節を受けない2つのプロモ-タ-によって転写されることを証明した。(論文3)2.RuvCタンパクを多量に生産させる系を構築し、このタンパクを多量に、しかも高度に精製することができた。(論文4,)3.RuvCは組換え中間体であるHolliday構造を特異的に切断するエンドヌクレア-ゼであることを証明した。(論文4)4.RuvAはDNA結合タンパクで,RuvBはATPase活性をもち、DNAと結合したRuvAはRuvBのもつATPase活性を著しく促進することを証明した。(論文1,2)5.RuvAーRuvB複合体はプラスミド上のInvertedーRepeat領域に形成させた十字型構造を解消させる機能をもつことを発見した。この反応はATPの加水分解を必要とした。この活性は組換え過程での相同な二重鎖DNAの間での単鎖の交換(strandーexchange)反応と同等であると考えられる。(論文1,2)以上の実験結果よりRuvAーRuvBはRecAによって形成されたHolliday構造に特異的に作用して、strandーexchange反応を促進し、RuvCはHolliday構造を分離して組換え反応を完成される機能をもつと考えられる。更に私達は大腸菌のDNAポリメラ-ゼIIの役割を研究したが、この酵素は生体内で、接合による組換え反応には必要ないことを明らかにした。(論文5)

众所周知，大肠杆菌中的Ruva，Ruvb和Ruvc基因参与了DNA损伤的同胞重组和修复。今年，我们研究了RUVC基因和控制样式的结构分析。此外，纯化了RUVA，RUVB，RUVC蛋白，重组反应中的功能与各种类似物与Holliday结构反应，这是局部DNA重组的中间体，并研究了重组反应中的功能。 1。RUVC基因已涂有19kDa蛋白，并证明它将通过两个促销-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TA-TO-TANE转移。（论文3）2。建造了大量RUVC蛋白的系统，该蛋白质的纯化大量和高度。（论文4，3。（论文4）4。RUVA是DNA结构的蛋白，RUVB具有ATPase活性，并且与DNA结合的Ruva已被证明可以显着促进Ruvb的ATPase活性。（论文1，2）5.RUVA -RUVB复合物已被发现它们具有消除质粒上反向重复区域中形成的交叉型结构的功能。该反应需要ATP水解。该活性被认为等同于重组过程中家乡双链DNA之间的单个链替代（链-Exchange）反应。（纸1,2）RUVA -RUVB对RECA形成的Holliday结构具有特异性影响，以促进链交换反应，Ruvc分离了Holliday结构和和解反应。此外，我们研究了大肠杆菌的DNA Polyimera-Zi II的作用，但揭示了该酶对于粘结重组不是必需的。（论文5）