発癌物質によるDNA損傷と突然変異誘起の機序

致癌物造成 DNA 损伤和诱变的机制

• 批准号: 01015058
• 负责人: 品川 日出夫
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01015058/
• 关键词: DNA損傷; 突然変異; 放射線; 発癌; recA; umuDC遺伝子; ruvAB遺伝子

放射線や発癌物質によるDNA損傷の修復と突然変異の誘起に関与する遺伝子umuD、CおよびruvA、Bの機能を研究して、以下の成果を得た。1.ruvBはDNAの組換え修復に関与していることがしられていたが、それとオペロンを形成しているruvAもDNA修復に関与していることを証明した。2,X線照射によって、umuD、C依存性と、ruvA、B依存性2種類のpremutagenic lesionができることを証明した。3.大腸菌でRuvBタンパクの多量生産株を作成し、精製した。RuvBはATPとADPに結合する性質をもち、弱いATP分解活性をしめした。同様にRuvAタンパクも精製し、RuvAは単鎖および二重鎖DNAと結合する性質があることを明らかにした。DNAと結合したRuvAはRuvBのもつATPase活性を促進することを証明した。4.細胞がDNAに損傷を受けると、RecAタンパクが活性化されて、UmuDおよびMucAタンパクのproteolytic processingを促進して、突然変異誘起の反応に関与する活性型に変えることを証明した。5.T7ファージの系を利用して、UmuDとUmuCタンパクおよびこれらのアナログであるMucAとMucBタンパクを大腸菌で多量生産することに成功した。UmuDおよびMucAタンパクを精製することができた。現在UmuCとMucBタンパクの精製を試みている。

我们研究了基因umuD、C和ruvA、B的功能，这些基因参与修复由辐射和致癌物引起的DNA损伤以及诱导突变，并获得了以下结果。 1. RuvB已知参与DNA重组修复，但我们证明与它形成操纵子的ruvA也参与DNA修复。 2.我们证明了X射线照射产生了两种类型的诱变前病变，一种依赖于umuD和C，另一种依赖于ruvA和B。 3.我们在大肠杆菌中创建并纯化了RuvB蛋白生产菌株。 RuvB具有与ATP和ADP结合的特性，表现出较弱的ATP降解活性。他们还纯化了RuvA蛋白，发现RuvA具有结合单链和双链DNA的特性。我们证明 RuvA 与 DNA 结合可促进 RuvB 的 ATP 酶活性。 4.我们证明，当细胞受到DNA损伤时，RecA蛋白被激活并促进UmuD和MucA蛋白的蛋白水解加工，将它们转化为参与诱变反应的活性形式。 5.利用T7噬菌体系统，我们在大肠杆菌中成功生产了大量的UmuD和UmuC蛋白，以及它们的类似物MucA和MucB蛋白。我们能够纯化 UmuD 和 MucA 蛋白。我们目前正在尝试纯化 UmuC 和 MucB 蛋白。

项目成果

H.Iwasaki: "Involvement in DNA repair of the ruvA gene of Escherichia coli." Mol.Gen.Genet.219. 328-331 (1989)

H.Iwasaki：“参与大肠杆菌 ruvA 基因的 DNA 修复。”

T.Shiba: "Proteolytic activation of UmuD and MucA proteins for SOS mutagenesis." Antimutagenesis and anticarcinogenesis mechanisms II.edited by Y.Kuroda,D.M.Shankel,and M.D.Waters.(Plenum Publishing Corporation). 353-356 (1990)

T.Shiba：“UmuD 和 MucA 蛋白的蛋白水解激活，用于 SOS 诱变。”

H.Iwasaki: "Overproduction,purification,and ATPase activity of the Escherichia coli RuvB protein involved in DNA repair." J.Bacteriol.171. 5276-5280 (1989)

H.Iwasaki：“参与 DNA 修复的大肠杆菌 RuvB 蛋白的过量生产、纯化和 ATP 酶活性。”