IL-2受容体抗体を用いた免疫抑制剤の開発

使用IL-2受体抗体开发免疫抑制剂

基本信息

批准号：
02557113
负责人：
内山卓
金额：
$ 7.87万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1991
项目状态：
已结题

项目摘要

IL-2受容体α鎖、β鎖へのIL-2結合をそれぞれ阻害する抗Tac抗体(anti-Tac)、2R-B抗体(2R-B)を精製し、それに植物毒であるリシンのA鎖(RTA)を結合させ、その効果を調べた。anti-Tac-RTAは、α鎖を発現しているHut102等の細胞株の蛋白合成( ^3H-leucine incorporation)を最大90%阻害すると共に、その増殖を阻止する。一方、2R-B-RTAもβ鎖を発現しているYT2C2等の細胞株の蛋白合成を最大90%阻害すると共に、その増殖を阻止した。しかしながら、それぞれ、α鎖、β鎖を発現していない細胞株に対しては、増殖抑制効果は認められなかった。又、これらimmunotoxinの蛋白合成に対する効果は、NH_4Cl等の添加により増強(最大99%)した。次に、免疫抑制作用を検討する目的で、2R-B-RTAの混合リンパ球培養(MLC)、LAK細胞活性への効果を見た。MLCでのDNA合成は最大約80%阻害され、LAK細胞のDNA合成も約60%阻害したが、RTAの非特異的なDNA合成阻害も見られ、今後の臨床応用に関し問題となる可能性が考えられた。又、成人T細胞白血病(ATL)は、その白血病細胞が構成的にα鎖、β鎖を発現しているため、これらのimmunotoxinを用いた治療効果を検討する目的で、ATL患者末梢血単核球の蛋白合成に対する効果を見た。分離直後の細胞に対しては蛋白合成阻害は認めないが、数日間培養した細胞に対しては、anti-Tac-RTAは30-40%、2R-B-RTAは60%の蛋白合成阻害を認めた。このように、RTA結合IL-2受容体抗体は、少なくともinvitroの実験結果からは、免疫抑制剤として治療に用いうる可能性が十分にあると考えられた。

我们纯化了分别抑制IL-2与IL-2受体α链和β链结合的抗Tac抗体（anti-Tac）和2R-B抗体（2R-B），并将其添加到蓖麻毒素A中，即我们结合了该链（RTA）并研究了其效果。在表达 α 链的细胞系（例如 Hut102）中，抗 Tac-RTA 可抑制高达 90% 的蛋白质合成（^3H-亮氨酸掺入），并阻止其增殖。另一方面，2R-B-RTA 还能抑制表达 β 链的细胞系（如 YT2C2）中高达 90% 的蛋白质合成，并抑制其增殖。然而，对于不表达α链或β链的细胞系，没有观察到生长抑制作用。此外，通过添加NH_4Cl等，这些免疫毒素对蛋白质合成的影响增强（高达99%）。接下来，为了检查 2R-B-RTA 的免疫抑制作用，我们检查了 2R-B-RTA 对混合淋巴细胞培养物 (MLC) 和 LAK 细胞活性的影响。 MLC中的DNA合成被抑制高达约80%，LAK细胞中的DNA合成也被抑制了约60%，但也观察到RTA对DNA合成的非特异性抑制，这可能给未来的临床应用带来问题是这样想的。此外，在成人T细胞白血病（ATL）中，白血病细胞组成性表达α链和β链，因此为了检查这些免疫毒素的治疗效果，我们对ATL患者的外周血单核细胞进行了效果观察。小球对蛋白质合成的影响。分离后立即在细胞中没有观察到蛋白质合成抑制，但在培养数天的细胞中，抗-Tac-RTA抑制蛋白质合成30-40%，2R-B-RTA抑制蛋白质合成60%，我承认。因此，至少从体外实验的结果来看，认为RTA结合IL-2受体抗体具有作为免疫抑制剂在治疗上使用的良好可能性。