IL-2受容体抗体を用いた免疫抑制剤の開発

使用IL-2受体抗体开发免疫抑制剂

基本信息

批准号：
02557113
负责人：
内山卓
金额：
$ 7.87万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Developmental Scientific Research (B)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至 1991
项目状态：
已结题

项目摘要

IL-2受容体α鎖、β鎖へのIL-2結合をそれぞれ阻害する抗Tac抗体(anti-Tac)、2R-B抗体(2R-B)を精製し、それに植物毒であるリシンのA鎖(RTA)を結合させ、その効果を調べた。anti-Tac-RTAは、α鎖を発現しているHut102等の細胞株の蛋白合成( ^3H-leucine incorporation)を最大90%阻害すると共に、その増殖を阻止する。一方、2R-B-RTAもβ鎖を発現しているYT2C2等の細胞株の蛋白合成を最大90%阻害すると共に、その増殖を阻止した。しかしながら、それぞれ、α鎖、β鎖を発現していない細胞株に対しては、増殖抑制効果は認められなかった。又、これらimmunotoxinの蛋白合成に対する効果は、NH_4Cl等の添加により増強(最大99%)した。次に、免疫抑制作用を検討する目的で、2R-B-RTAの混合リンパ球培養(MLC)、LAK細胞活性への効果を見た。MLCでのDNA合成は最大約80%阻害され、LAK細胞のDNA合成も約60%阻害したが、RTAの非特異的なDNA合成阻害も見られ、今後の臨床応用に関し問題となる可能性が考えられた。又、成人T細胞白血病(ATL)は、その白血病細胞が構成的にα鎖、β鎖を発現しているため、これらのimmunotoxinを用いた治療効果を検討する目的で、ATL患者末梢血単核球の蛋白合成に対する効果を見た。分離直後の細胞に対しては蛋白合成阻害は認めないが、数日間培養した細胞に対しては、anti-Tac-RTAは30-40%、2R-B-RTAは60%の蛋白合成阻害を認めた。このように、RTA結合IL-2受容体抗体は、少なくともinvitroの実験結果からは、免疫抑制剤として治療に用いうる可能性が十分にあると考えられた。

纯化了IL-2受体与IL-2受体的IL-2结合的抗TAC抗体（抗TAC）和2R-B抗体（2R-B），并纯化了IL-2受体的α-和β链，并且植物毒性赖氨酸的A链（RTA）与IL-2受体的α-链结合了IL-2受体和该效应的α-链。抗TAC-RTA抑制蛋白质的合成（^3H-达氨酸感染），例如HUT102的细胞系（表达α链）的蛋白质合成，最高为90％，并防止其增殖。另一方面，2R-B-RTA还抑制了表达β链的YT2C2等细胞系中的蛋白质合成，高达90％，并防止其增殖。但是，对于未表达α链和β链的细胞系未观察到生长抑制作用。此外，通过添加NH_4CL等，免疫毒素对蛋白质合成的影响得到了增强（高达99％）。接下来，为了研究免疫抑制作用，我们观察到2R-B-RTA对混合淋巴细胞培养（MLC）（MLC）和LAK细胞活性的影响。 MLC中的DNA合成受到大约80％的抑制，而LAK细胞中的DNA合成也被约60％抑制，但也观察到非特异性抑制RTA的DNA合成的抑制作用，从而为未来的临床应用创造了一个问题。此外，由于白血病细胞组成性地表达了α-和β链，我们观察到了ATL患者的外周血单核细胞的蛋白质合成的作用，其目的是使用这些免疫毒素检查治疗的作用。尽管在分离后立即观察到在细胞中未观察到蛋白质合成的抑制作用，但发现抗TAC-RTA抑制30-40％的蛋白质合成，发现2R-B-RTA抑制蛋白质在培养的细胞中抑制60％的蛋白质合成几天。因此，人们认为，至少从体外实验的结果中，RTA结合IL-2受体抗体可以用作免疫抑制剂。