造血幹細胞の自己複製を支持する新しい因子の同定と単離

支持造血干细胞自我更新的新因子的鉴定和分离

• 批准号: 06277208
• 负责人: 内山 卓
• 金额: $ 1.86万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06277208/
• 关键词: 造血幹細胞; 自己複製; 血球分化

我々は、造血を支持するストローマ細胞株(MS-5)及びストローマ依存性多能性幹細胞株(Myl-D-7)を樹立し、報告した。本年度は、次の2点について研究を進めた。1.上記の細胞株を用いた共培養系にて、以下の事を明らかにした。(1)Myl-D-7細胞は、ストローマ依存性に増殖し、IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、Stem cell factor(SCF)、Epoによっては維持し得ない。(2)GM-CSFにより、分化する。(3)一部のポプレーションがリンパ球系、顆粒球系、または、赤血球系分化抗原を表出している。2.上記の共培養系におけるストローマ細胞/造血幹細胞の細胞間機構を構成する因子の同定を目的とした″因子の検定″には、長期の培養試験が必要であり、短期間での細胞増殖試験等を指標とした、従来の精製単離による因子の同定が困難であるため、新たに、本因子の検定系の確立が望まれる。そこで、Myl-D-7細胞がストローマ細胞の非存在下ではApoptosisにいたるが、存在下でBcl-2を発現し、自己複製する事を踏まえて、以下の事を行った。すなわち、(1)Bcl-2のプロモーター/エンハンサー領域を得た。(2)ヒトIL-2レセプターα鎖(Tac抗原)をレポーターとしたプロモーター/エンハンサー検定用プラスミドを作製した。(3)得られた領域を上記プラスミドにクローニングし、ストローマ細胞よりのBcl-2発現誘導シグナルに反応し、IL-2レセプターα鎖(Tac抗原)を発現するコンストラクトを得た。(4)現在、このプラスミドをストローマ依存性細胞株にエレクトロポレーション法にて導入し、導入された細胞中より上記の目的に適したクローンを抗Tac抗体を用いて選択中である。(5)クローン選択後、この検定系を用いて上記の細胞間機構を構成する因子の同定を進める予定である。

我们建立并报道了支持造血的基质细胞系（MS-5）和基质依赖性多能干细胞系（Myl-D-7）。今年，我们主要做了以下两点研究。 1. 我们通过使用上述细胞系的共培养系统澄清了以下内容。 (1) Myl-D-7 细胞以基质依赖性方式增殖，不能通过 IL-2、IL-3、IL-6、IL-7、干细胞因子 (SCF) 或 Epo 维持。 (2)与GM-CSF相鉴别。 (3)一些群体表达淋巴细胞、粒细胞或红系分化抗原。 2.旨在鉴定构成上述共培养系统中的基质细胞/造血干细胞的细胞间机制的因子的“因子测定”需要长期的培养测试，并且需要在短时间内进行细胞增殖，因为这是困难的。为了通过常规纯化和使用测试等分离来鉴定该因子，需要建立针对该因子的新的测定系统。因此，基于Myl-D-7细胞在没有基质细胞的情况下发生凋亡，但在基质细胞存在的情况下表达Bcl-2并自我复制的事实，我们进行了以下操作。即，(1)获得Bcl-2的启动子/增强子区域。 (2)使用人IL-2受体α链(Tac抗原)作为报告基因创建用于启动子/增强子测定的质粒。 (3)将获得的区域克隆到上述质粒中以获得与来自基质细胞的Bcl-2表达诱导信号反应并表达IL-2受体α链(Tac抗原)的构建体。 (4)目前，通过电穿孔将该质粒导入基质依赖性细胞系，并使用抗Tac抗体从导入的细胞中选择适合上述目的的克隆。 (5)克隆选择后，我们计划使用该检测系统来鉴定构成上述细胞间机制的因素。