ILー2およびエリスロポエチンに共通するシグナル伝達機構の検索

寻找 IL-2 和促红细胞生成素共有的信号转导机制

基本信息

批准号：
03454524
负责人：
内山卓
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、cDNA単離によりその構造が次々と明らかにされているサイトカイン受容体のうち、インタ-ロイキン2(ILー2)受容体β鎖は、エリスロポエチン(Epo)受容体などと共に、その構造の共通性から、一群の受容体ファミリ-に属し、同一あるいは類似のシステムを介して情報が伝達される可能性が考えられている。私達は、ILー2およびEpoによるシグナル伝達系を解析する目的で、1)Epo反応性細胞株のEpo刺激後に出現するチロシンリン酸化蛋白の解析、2)Epo反応性細胞株へのヒトILー2受容体β鎖cDNAの導入実験、を行った。まず、Epo依存性増殖を示す、マウスILー3依存性増殖細胞株FDCーP2のサブクロンであるEPーFDCーP2、およびEpoによりHb合成細胞に分化するマウス赤白血病由来ELMーIー1細胞株を、それぞれ、Epoで刺激し、抗リン酸化チロシン抗体を用いて、ウエスタンブロッティング法を行ったところ、両細胞株とも、刺激5分以内に、約95KDaのチロシンリン酸化蛋白の出現を認めた。次に、上記二種類のEpo反応性細胞株に、ILー2受容体β鎖cDNAを導入してβ鎖を発現させたところ、ILー2刺激でも、Epo刺激と同様の細胞増殖,分化を誘導することが可能となった。さらに、ウエスタン法で検索したところ、Epo刺激で出現するチロシンリン酸化蛋白と同じ分子量のチロシンリン酸化蛋白が、ILー2刺激5分以内に検出された。このように、約95KDaのチロシンリン酸化蛋白は、Epo刺激だけでなく、ILー2刺激によっても出現することから、少くとも、ILー2およびEpoによる細胞増殖,分化に深く関与している可能性が考えられる。また、上記の結果は、ILー2とEpoによるシグナル伝達系には、共通の機構が働いている可能性を強く示唆している。

近年来通过cDNA分离陆续揭示其结构的细胞因子受体中，白细胞介素2（IL-2）受体β链与促红细胞生成素（Epo）受体具有共同的结构，因此其性别不同。认为它们属于受体家族，并且信息可以通过相同或相似的系统传输。我们的目的是通过 1) 分析 Epo 刺激 Epo 反应性细胞系后出现的酪氨酸磷酸化蛋白，以及 2) 将人 IL-2 注射到 Epo 反应性细胞系 -2 中来分析 IL-2 和 Epo 的信号转导系统。进行受体β链cDNA导入实验。首先，EP-FDC-P2，小鼠 IL-3 依赖性增殖细胞系 FDC-P2 的亚克隆，表现出 Epo 依赖性增殖，以及小鼠红白血病来源的 ELM-I-1 细胞，可分化为 Hb 合成细胞Epo 细胞。当用 Epo 刺激每个细胞系并使用抗磷酸酪氨酸抗体进行蛋白质印迹时，观察到在两个细胞系中刺激后 5 分钟内出现约 95 KDa 的酪氨酸磷酸化蛋白。接下来，当我们将IL-2受体β链cDNA导入上述两类Epo反应性细胞系中表达β链时，我们发现IL-2刺激引起了与Epo刺激相同的细胞增殖和分化。成为可能诱导另外，用Western法进行检索时，在IL-2刺激后5分钟内检测到与Epo刺激时出现的酪氨酸磷酸化蛋白质具有相同分子量的酪氨酸磷酸化蛋白质。由于约95KDa的酪氨酸磷酸化蛋白不仅在Epo刺激下出现，而且在IL-2刺激下出现，因此它可能至少深度参与IL-2和Epo诱导的细胞增殖和分化。此外，上述结果强烈表明，IL-2和Epo信号转导系统中可能存在共同的机制。