ILー2およびエリスロポエチンに共通するシグナル伝達機構の検索

寻找 IL-2 和促红细胞生成素共有的信号转导机制

基本信息

批准号：
03454524
负责人：
内山卓
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (B)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

近年、cDNA単離によりその構造が次々と明らかにされているサイトカイン受容体のうち、インタ-ロイキン2(ILー2)受容体β鎖は、エリスロポエチン(Epo)受容体などと共に、その構造の共通性から、一群の受容体ファミリ-に属し、同一あるいは類似のシステムを介して情報が伝達される可能性が考えられている。私達は、ILー2およびEpoによるシグナル伝達系を解析する目的で、1)Epo反応性細胞株のEpo刺激後に出現するチロシンリン酸化蛋白の解析、2)Epo反応性細胞株へのヒトILー2受容体β鎖cDNAの導入実験、を行った。まず、Epo依存性増殖を示す、マウスILー3依存性増殖細胞株FDCーP2のサブクロンであるEPーFDCーP2、およびEpoによりHb合成細胞に分化するマウス赤白血病由来ELMーIー1細胞株を、それぞれ、Epoで刺激し、抗リン酸化チロシン抗体を用いて、ウエスタンブロッティング法を行ったところ、両細胞株とも、刺激5分以内に、約95KDaのチロシンリン酸化蛋白の出現を認めた。次に、上記二種類のEpo反応性細胞株に、ILー2受容体β鎖cDNAを導入してβ鎖を発現させたところ、ILー2刺激でも、Epo刺激と同様の細胞増殖,分化を誘導することが可能となった。さらに、ウエスタン法で検索したところ、Epo刺激で出現するチロシンリン酸化蛋白と同じ分子量のチロシンリン酸化蛋白が、ILー2刺激5分以内に検出された。このように、約95KDaのチロシンリン酸化蛋白は、Epo刺激だけでなく、ILー2刺激によっても出現することから、少くとも、ILー2およびEpoによる細胞増殖,分化に深く関与している可能性が考えられる。また、上記の結果は、ILー2とEpoによるシグナル伝達系には、共通の機構が働いている可能性を強く示唆している。

在近年来通过cDNA隔离揭示结构的细胞因子受体中，白介素2（IL-2）受体β链以及促红细胞生成素（EPO）受体属于一组受体家族，这是由于结构的共同点，并且认为信息可能通过同一或相似的系统传播。我们进行了1）分析酪氨酸磷酸化的蛋白质，这些蛋白质在EPO刺激EPO反应性细胞系后出现，2）将人IL-2受体β-链链球cDNA引入EPO反应性细胞系。首先，EP-FDC-P2是小鼠IL-3依赖性增殖细胞系FDC-P2的亚克隆，它表现出EPO依赖性增殖，并且使用EPO和Western Prodies刺激了EPO刺激EPO的小鼠红血症衍生的ELM-I-I-1细胞系，它们通过EPO刺激了EPO的HB-合成细胞中的HB-合成细胞。两种细胞系在刺激后5分钟内显示出约95 kDa的酪氨酸磷酸化蛋白。接下来，当将IL-2受体β链cDNA引入上面的两个EPO反应性细胞系以表达β链时，IL-2刺激能够诱导细胞增殖和分化，类似于Epo刺激。此外，在使用西方方法进行搜索时，在IL-2刺激后的5分钟内检测到了与EPO刺激中出现的酪氨酸磷酸化蛋白具有相同分子量的磷酸化蛋白。因此，大约95 kDa的酪氨酸磷酸化蛋白不仅是通过EPO刺激而出现的，而且是通过IL-2刺激而出现的，因此至少它可能与IL-2和EPO的细胞增殖和分化深度参与。此外，以上结果强烈表明，在由IL-2和EPO引起的信号转导系统中可能有一个共同的机制。