真核生物に遍在するプロテアソ-ム(多成分プロテア-ゼ復合体)の遺伝子構造解析

真核生物中普遍存在的蛋白酶体（多组分蛋白酶复合物）的遗传结构分析

基本信息

批准号：
01570159
负责人：
田中啓二
金额：
$ 1.22万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

(1):ラットプロテアソ-ムのcDNAクロ-ニングと一次構造の解析ラット肝プロテアソ-ムを構成する複数のサブユニット成分を逆相高速液体クロマトグラフイ-で分離し、その溶出順にRC1からRC10と命名した。各成分の部分構造を基に合成したヌクレオチドをプロ-ブとしてラット肝のcDNAライブラリ-をスクリ-ニングして、プロテアソ-ムをコ-ドするcDNAクロ-ンを分離した。そのヌクレオチド配列から現在RC2,RC3,RC5,RC8,RC9の5種の成分の一次構造を決定した。これら全てのサブユニットは独立した遺伝子にコ-ドされていたが、これらの成分と構造類似性を示す既知の蛋白質は存在しなかった。しかしプロテアソ-ムのサブユニット間では高いホモロジ-が認められたので、プロテアソ-ムは一群のファミリ-を構成する遺伝子産物が集合した新種の複合体であると結論された。(2):ヒトプロテアソ-ムのcDNAクロ-ニングと一次構造の解析ラットプロテアソ-ムの成分RC2とRC8のcDNAをプロ-ブとしてヒト肝癌細胞のcDNAライブラリ-をスクリ-ニングし、ヒトプロテアソ-ムの成分HC2とHC8をコ-ドするcDNAクロ-ンを単離し、そのヌクレオチド配列より一次構造を決定した。このヒトHC2,HC8とラットRC2,RC8の一次構造は95%以上同一であり、これらが同種の機能を保持している可能性が示唆された。(3):イ-ストプロテアソ-ムのcDNAクロ-ニングと一次構造の解析イ-ストプロテアソ-ムの抗体をプロ-ブとしてイ-ストcDNAの発現系ライブラリ-をスクリ-ニングし、二種の成分YC1とYC7-αのcDNAを単離しその一次構造を決定した。これらの成分はラット及びヒト成分と互いに高い構造類似性があり、プロテアソ-ムの成分群は進化的に保存された共通の遺伝子が生じてきたことが示唆された。

(1)：大鼠蛋白酶体的cDNA克隆及一级结构分析通过反相高效液相色谱分离组成大鼠肝蛋白酶体的多个亚基成分，洗脱顺序为RC1至RC10。使用基于各成分的部分结构合成的核苷酸作为探针筛选大鼠肝脏cDNA文库，并分离编码蛋白酶体的cDNA克隆。根据核苷酸序列，我们确定了 RC2、RC3、RC5、RC8 和 RC9 五个组件的一级结构。尽管所有这些亚基都是由独立基因编码的，但没有已知的蛋白质与这些成分表现出结构相似性。然而，由于在蛋白酶体的亚基之间观察到高度的同源性，因此得出结论：蛋白酶体是由组成家族的基因产物组成的新型复合物。 (2)：人蛋白酶体的cDNA克隆和一级结构分析以大鼠蛋白酶体组分RC2和RC8的cDNA为探针筛选人肝癌细胞cDNA文库，分离编码组分HC2和HC8的cDNA克隆，并测定其一级结构。从它们的核苷酸序列。人HC2、HC8与大鼠RC2、RC8的一级结构相似度超过95%，表明它们可能具有相似的功能。 (3)：酵母蛋白酶体的cDNA克隆和一级结构分析以酵母蛋白酶体抗体为探针筛选酵母cDNA表达文库，分离出YC1和YC7-α的cDNA并确定其一级结构。这些成分与大鼠和人类成分具有高度的结构相似性，表明进化上保守的常见基因是作为一组蛋白酶体成分而出现的。