C-キナーゼの神経網膜における機能的役割りについて

C-激酶在神经视网膜中的功能作用

基本信息

批准号：
60223015
负责人：
加藤聖
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Special Project Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60223015/
关键词：
網膜カリシウム Cキナーゼ神経伝達物質

项目摘要

(目的) 神経網膜におけるCキナーゼの機能的意義を探るため、網膜Cキナーゼの諸性質やその局在、および神経伝達物質放出機構への本酵素の役割を検索した。(結果)【I】)網膜Cキナーゼの諸性質の検索コイ網膜の10万xg上清をイオン交換カラムクロマトグラフィ(DE52セルロースカラム)により部分精製した可溶性分画を粗酵素標品として、Cキナーゼの諸性質を調べたところ、網膜には12.0μmol/μg protein/3minという高いCキナーゼ活性が存在し、【Ca^(21)】やフォスフォリピドの要求性、また発癌プロモーターの一種であるTPA(【10^(-9)】g)により直接活性化されることなど、従来脳でいわれている本酵素の諸性質と全く一致することがわかった。このことは網膜での本研究を遂行するにあたり確実な根拠を提供するものである。【II】)神経伝達物質の放出実験あらかじめ、【^3H】標識神経伝達物質を取り込ませた後、種々の薬剤を添加しその刺激放出量を側定したところ、網膜外水平細胞からの【^3H】α-アミノ酪酸(GABA)の放出は、カルシウムイオン非依存性、他方層間細胞からの【^3H】ドーパミン(DA)の放出はカリシウム依存性であることが判明した。そこで、両者の放出に及ぼすカルシウイオノフォアA23187、水溶性ジグリセリドである1-オレイル-2-アセチルグリセロール(OAG)の影響を比較したところ、【^3H】DAの放出がA23187(【10^(-6)】M)、DAG(5×【10^(-5)】M)で約2倍促進され、他方【^3H】GABAの放出には無効であった。以上から網膜DAの放出にはCキナーゼが関与していることが示唆された。【III】)Cキナーゼの網膜内局在に関する研究選択的なグリアトキシンであるL-α-アミノアジピン酸を眼球内に注射したところ、速やかにグリアであるミューラー細胞の破壊変性が生じた。現在この標本を用い、Cキナーゼの活性や機能について追求中である。

（目的）探索C激酶在神经素中的功能意义，我们搜索了视网膜C激酶的特性，它们的定位以及该酶在神经递质释放机制中的作用。 (Results) [I]) Search for properties of retinal C kinases When we investigated the properties of C kinases using a soluble fraction obtained by partially purified 100,000 xg supernatant of carp retina by ion-exchange column chromatography (DE52 cellulose column) as a crude enzyme preparation, we found that the retina has a high C kinase activity of 12.0 μmol/μg protein/3最小，完全与大脑中描述的该酶的特性完全一致，例如被TPA直接激活（[[10^（ - 9）] G），这是一种类型的致癌启动子。这为在视网膜上进行这项研究提供了可靠的基础。 [ii]）掺入[^3H]标记的神经递质后的神经递质释放实验，添加各种药物以确定刺激释放的量。已经发现，从脱膜外细胞中释放[^3H]α-氨基丁酸（GABA）是钙离子非依赖性的，而在层间细胞中释放[^3H]多巴胺（DA）的释放是钙依赖性的。因此，当比较钙基A23187和水溶性甘油三酸酯1-烯基-2-乙酰甘油（OAG）对两者释放的影响时，[^3H] DA的释放释放的加速度约为A23187（A23187（[10^（-6）M）和DAG（[10^（-6）M）和DAG（5）和其他零（5×）[10^10^（ - （5））对[^3H] GABA释放无效。以上表明C激酶参与视网膜DA的释放。 [iii]）研究C激酶的视网膜内定位时，当将胶质神经毒素（一种选择性神经胶质素）注入眼睛时，神经胶质细胞的迅速破坏性变性。我们目前正在使用此标本来追求C激酶的活性和功能。