カリシウム・リン脂質結合蛋白(CPBs)の活性ドメインおよび胎盤での発現について

钙磷脂结合蛋白（CPB）的活性结构域及其在胎盘中的表达

基本信息

批准号：
02670730
负责人：
村田誠
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Akita University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1990
资助国家：
日本
起止时间：
1990 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-02670730/
关键词：
Calphobindin カルシウム・リン脂質結合蛋白 annexin phospholipase inhibitor mRNA

项目摘要

カルシウム・リン脂質結合蛋白(CPBs)は、我々をはじめとして種々の施設より報告され、世界的には、annexin femilyとして統一名称が使用されつつある。今回は、一つには、CPBsの抗phospholipase作用と、抗凝固活性について検討し、もう一つは、CPBーIについて、そのmRNAのnothern blottingについて基礎的に検討した。具体的には、前者では、まずCPBーI,CPBーII,CPBーIII,lipocortinにおいてのphospholipase A_2(PLA_2)およびphospholipase C(PLC)活性の抑制能を種々条件下で検討した。すなわち、至適カルシウム濃度、至適pHの異なる由来の違うPLA_2での検討、さらに、同一モル濃度における各CPBsの抑制能の比較などである。その結果を以下に示す。1)pH8.0が至適pHであるブタ膵由来のPLA_2とpH6.5であるマムシ毒由来のそれで,CPBーIでの最大抑制活性出現のカルシウム濃度は、どちらも20mMであった。一方、CPBーIIでは、どちらも10mMであった。2)ブタ膵由来のPLA_2の抑制活性は、同一モル濃度で比較し、CPBーII>CPBーI>CPBーIII>lipocortinの順であった。これは、マムシ毒由来のPLA_2でも同様の傾向を示した。さらに、抗凝固活性も同様の順を示した。3)同一モル濃度におけるPLC抑制は、CPBーI>CPBーII>CPBーIII>lipocortinの順であった。PLA_2とPLCでの差は、各々の基質であるphosphatidyl cholineとphsphatidyl inositolに対するCPBsの結合能の差と一致した結果であった。CPBsとリン脂質の結合能の結果からもふまえて考察すると、CPBsのカルシウム結合ドメインが、PLA_2,PLC,及び凝固抑制に共通した抑制活性ドメインであるものと推察された。次にCPBーI mRNAについては、胎盤組織よりRNAを抽出し、agarose電気泳動後にmenbraneに転写し、 ^<32>PをラベルしたCPBーI cDNA断片をprobeとしてhybridizationを行った。mRNA抽出、hybridizationの条件設定などで苦労したが、胎盤では約1.6kbの単一のCPBーI mRNAが証明された。

包括美国在内的各种机构已经报道了钙磷脂结合蛋白（CPB），统一名称在全球范围内用作女性膜联蛋白。在本文中，我们研究了CPBS的抗磷脂酶和抗凝活性，另一个基于CPB-I和其mRNA的Nothern印迹。具体而言，在前者中，在各种条件下首先检查了CPB-I，CPB-II，CPB-III和Lipocortin中抑制磷脂酶A_2（PLA_2）和磷脂酶C（PLC）活性的能力。也就是说，该研究是在不同的PLA_2上进行的，该研究源自不同的最佳钙浓度和最佳pH，此外，比较每个CPB的抑制能力以相同的摩尔浓度的比较。结果如下所示。 1）CPB-I中最大抑制活性的钙浓度均为20 mm，来自Pig Pancreas的PLA_2，其中pH 8.0是最佳的pH值，并且来自Viper Venom，pH 6.5。另一方面，在CPB-II中，均为10mm。 2）在相同的摩尔浓度下比较了PLA_2的抑制活性，并且按CPB-II> CPB-I> CPB-III> lipocortin的顺序进行比较。这也显示了PLA_2的类似趋势，该趋势是从Viper Bug Poison得出的。此外，抗凝活性以相同的顺序显示。 3）在相同摩尔浓度下的PLC抑制为CPB-I> CPB-II> CPB-III>脂皮质素的顺序。 PLA_2和PLC之间的差异与CPBS与每个底物，磷脂酰胆碱和phsphatidyl inositol的结合能力的差异一致。考虑到CPB和磷脂的结合能力的结果，据估计，CPB的钙结合结构域是PLA_2，PLC和凝结抑制的抑制活性域。接下来，从胎盘组织中提取RNA，并在琼脂糖电泳后将其转录为遗传，并使用用 ^<32> P标记为探针的CPB-I cDNA片段进行杂交。尽管mRNA提取和杂交条件存在困难，但在胎盘中证明了一个约1.6 kb的单个CPB-I mRNA。