金魚再生視神経は成熟視蓋において如何にシナプス再機構化を獲得するか

再生的金鱼视神经如何在成熟的视顶盖中获得突触重组？

基本信息

批准号：
14034219
负责人：
加藤聖
金额：
$ 4.35万
依托单位：
Kanazawa University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

魚類は哺乳類と異なり視神経を切断しても再生する。この視神経再生の分子機構を究明するため再生中に発現が上昇する遺伝子をクローニング技術により再生時期別に取り出し塩基配列やリコンビナント蛋白を大腸菌等に作らせその機能について解析を進めた。結果は以下の通りである。1)レチノール結合蛋白分子量約22kDaの分泌性蛋白であり視神経切断後一過性に上昇し5日でピークとなり10日で元に戻った。培養実験より本蛋白はレチノールと共に神経突起のトリガーとなっていることが判明した。2)トランスグルタミネース分子量約75kDaの蛋白架橋酵素であり視神経切断後10日くらいから上昇し20日でピークとなり40日で元に戻った。融合蛋白の添加実験により本蛋白酵素は神経突起伸展の太さ、長さ、本数などを著明に促進した。3)視蓋で発現が上昇する分子視蓋で視神経切断後60日ときわめて遅い時期に増えるクローンを3個取り出した。ノーザン法によりそのmRNAの発現ピークは60日であり4〜5ヵ月で元に戻った。この分子の機能については現在の所不明である。更に軸索退縮分子であるエフリン、セマフォリン両分子のクローニングにも成功した。これら分子のシナプス再編成期における役割りについて視蓋における免疫染色、リガンドの受容体Eph、ニューロピリンの局在等について検討している所である。

与哺乳动物不同，即使切断视神经，鱼也会再生。为了研究视神经再生的分子机制，在不同的再生时间通过克隆技术提取了在再生过程中表达增加的基因，在大肠杆菌和其他类似的情况下产生了核苷酸序列和重组蛋白，并进行了分析，进行分析以分析其功能。结果如下：1）视黄醇结合蛋白A分泌蛋白的分子量约为22 kDa，并且在切断视神经后瞬间上升，在5天达到峰值并在10天内恢复正常。培养实验表明，该蛋白与视黄醇一起触发神经突。 2）经谷氨酸是一种蛋白质交联酶，分子量约为75 kDa，从切断视神经后的大约10天升起，并在20天达到峰值，在40天内恢复正常。添加融合蛋白的实验显着促进了厚度，长度，神经突延伸的数量等。3）提取了三个克隆，在切割视神经后60天，用分子底部增加了三个克隆，在底部增加了。通过北部方法，mRNA的峰值表达为60天，并且在4-5个月内恢复了正常。该分子的功能目前尚不清楚。此外，我们已经成功克隆了ephrin和Semaphorin，轴突回收分子。我们目前正在研究突触重排期间这些分子的作用，在底部进行免疫染色，配体的受体EPH和神经蛋白的定位。