脳のレイヤー形成を制御する蛋白質のプロテオリシスとトラフィッキングに関する研究

控制脑层形成的蛋白质水解和运输的研究

基本信息

批准号：
15029211
负责人：
服部光治
金额：
$ 4.48万
依托单位：
Nagoya City University (2004)The University of Tokyo (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

脳の層構造形成に必須の分泌蛋白質リーリンと、その機能発現に必須とされる細胞内蛋白質Dab1について生化学的・細胞生物学的解析を行い、以下のことを明らかにした。(1)リーリンを受容した細胞内でリン酸化を受け、さらに下流へシグナルを伝える分子と考えられてきたアダプター蛋白質Dab1が、リーリン受容体(VLDLR及びApoER2)の成熟(小胞体もしくはゴルジ体における)及び膜表面への輸送を制御している事を見いだした。また、Dab1はリーリンのエンドサイトーシスをも調節することを見いだした(Morimura et al. J. Biol. Chem.)。これらの結果から、Dab1の真の機能は、リーリン分子の細胞内外でのトラフィッキングを制御することであることが示唆された。(2)リーリンの特異的抗体を用いたカラムを作製し、リーリンを精製することに成功した。精製したリーリンは極めて不安定であり、水溶液中で数日以内にはほとんど検出できなくなることが解った。しかし非常に驚くべき事に、血清脂質や脳脂質抽出物を加えるとリーリンの安定性が飛躍的に増大することを発見した。このことは、リーリンには何らかの脂質性物質を結合する性質があり、それによってその機能が制御されていることを強く示唆する。(3)リーリンのC末端領域には塩基性アミノ酸残基に富む領域が存在する。この部分によってリーリンは細胞外基質(おそらく硫酸基を持つもの)と弱く相互作用することを発見した。

生化和细胞生物学分析是在分泌的蛋白reelin上进行的，这是脑层结构的形成至关重要的，而细胞内蛋白DAB1对于其功能表达至关重要，并阐明了以下内容。（1）我们发现，已在接收reelin的细胞中磷酸化的衔接蛋白DAB1被认为是一个分子，它是一个分子，该分子在下游传播，调节成熟（在内质网或高尔基体中）并运输到膜表面。我们还发现DAB1还调节reelin中的内吞作用（Morimura等人J.Biol。Chem。）。这些结果表明，DAB1的真实功能是调节reelin分子的细胞内和外部运输。（2）使用reelin的特定抗体制备一列，并成功纯化了reelin。发现纯化的卷轴非常不稳定，几天之内与水溶液几乎无关。但是，非常令人惊讶的是，我们发现添加血脂和脑脂质提取物极大地提高了reelin的稳定性。这强烈表明reelin具有结合某些脂质物质的特性，从而控制其功能。（3）在reelin的C末端区域中有一个富含碱性氨基酸残基的区域。已经发现该部分与细胞外基质（大概是硫酸盐基团）弱相互作用。