抗腫瘍活性を高めるエフェクター細胞および樹状細胞の選択的増幅法の開発

开发效应细胞和树突状细胞的选择性扩增方法以增强抗肿瘤活性

• 批准号: 15025220
• 负责人: 長棟 輝行
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025220/
• 关键词: 樹状細胞; 抗体; 受容体; 遺伝子治療; がん; 選択的増幅; 細胞障害性T細胞

本研究では、がん遺伝子治療における治療効果を向上させるために、抗体/サイトカイン受容体キメラを用いた遺伝子導入細胞の選択的増幅法を開発し、T細胞、樹状前駆細胞でその効果を検証することを目的としている。昨年度までに、エリスロポエチン受容体(EpoR)のEpo結合ドメインを抗フルオレセイン(F1)抗体のScFvで置換し、その細胞内ドメインをIL-6受容体β鎖であるgp130で置換したキメラ受容体(ScFv-gp130)が、F1標識BSA(BSA-F1)、もしくはF1 dimerに応答して増殖シグナルを伝達することが示された。そこで、我々の手法がよりがん治療に直結する細胞においても適用可能かどうかを検討した。まず、樹状前駆細胞の増殖はgp130とc-Kitシグナルの協同効果によりなされることが報告されているので、ScFv-gp130の細胞内ドメインをc-Kitに置換したキメラ受容体ScFv-Kitを構築し、治療用遺伝子モデルであるEGFP遺伝子とIRES配列を介して連結したキメラ受容体発現ベクターを作製した。まずはScFv-Kitをマウス骨髄から得た樹状前駆細胞に導入し、IL-6,sIL-6RαおよびBSA-F1を添加した培地中で選択した。その結果、EGFP陽性細胞を選択的に生存させることに成功した。さらにgp130とc-Kit双方のシグナル伝達を代用するために、gp130とc-Kitの細胞内ドメインをタンデムに連結したキメラ受容体ScFv-gp130-Kit,ScFv-Kit-gp130を作製し、同様に樹状前駆細胞に導入し、BSA-F1を添加した培地中で選択した。その結果、この場合もEGFP陽性細胞を選択的に生存させることに成功した。現在、選択された細胞が未分化維持されているかどうか、および樹状細胞への分化能を有しているかどうかを検証している段階である。また、TIL、CTLの増殖はIL-2によって促進されることが報告されているので、細胞内ドメインをIL-2受容体のβ鎖(ScFv-IL-2Rβ)、γ鎖(SCFv-IL-2Rγ)に置換したキメラ受容体を構築した。Ba/F3細胞での解析の結果、このキメラ受容体も機能的であることが確認された。現在、細胞傷害性T細胞での選択的増幅の実現可能性について検証中である。

在这项研究中，为了提高癌症基因治疗的治疗效果，我们开发了一种利用抗体/细胞因子受体嵌合体选择性扩增基因转移细胞的方法，并验证了其在T细胞和树突状祖细胞中的有效性。 。去年，我们开发了一种嵌合受体（ScFv），其中促红细胞生成素受体（EpoR）的Epo结合域被抗荧光素（F1）抗体ScFv取代，其胞内结构域被gp130取代， IL-6 受体 β 链（-gp130）可响应 F1 标记的 BSA (BSA-F1) 或 F1 二聚体传递增殖信号。因此，我们研究了我们的方法是否可以应用于与癌症治疗更直接相关的细胞。首先，据报道，树突状祖细胞的增殖是由gp130和c-Kit信号的协同作用引起的，因此我们使用了嵌合受体ScFv-Kit，其中ScFv-gp130的胞内结构域被c-取代我们构建了一个嵌合受体表达载体，通过 IRES 序列连接到 EGFP 基因，这是一种治疗基因模型。首先，将 ScFv-Kit 导入从小鼠骨髓中获得的树突状祖细胞，并在补充有 IL-6、sIL-6Rα 和 BSA-F1 的培养基中进行选择。结果，他们成功地选择性地保持了 EGFP 阳性细胞的存活。此外，为了替代gp130和c-Kit的信号转导，我们创建了嵌合受体ScFv-gp130-Kit，ScFv-Kit-gp130，其中gp130和c-Kit的胞内结构域串联连接将树突状祖细胞引入补充有 BSA-F1 的培养基中并进行选择。结果，在这种情况下，我们也成功地选择性地保持了 EGFP 阳性细胞的存活。我们目前正处于验证所选细胞是否保持未分化以及是否具有分化为树突状细胞的能力的阶段。此外，据报道IL-2可促进TIL和CTL的增殖，因此从IL-2的β链（ScFv-IL-2Rβ）和γ链（SCFv-IL-2Rβ）中分离出胞内结构域。 IL-2受体。我们构建了具有2Rγ取代的嵌合受体。 Ba/F3 细胞中的分析证实该嵌合受体也具有功能。我们目前正在验证细胞毒性 T 细胞选择性扩增的可行性。

项目成果

Kawahara, M. et al.: "Selection of genetically modified cell population using hapten-specific antibody/receptor chimera"Biochem.Biophys.Res.Commun.. 315. 132-138 (2004)

Kawahara, M. 等人：“使用半抗原特异性抗体/受体嵌合体选择转基因细胞群”Biochem.Biophys.Res.Commun.. 315. 132-138 (2004)

Kawahara, M. et al.: "Bypassing antibiotic selection : positive screening of genetically modified cells with an antigen-dependent proliferation switch"Nucleic Acids Res.. 31. e32 (2003)

Kawahara, M. 等人：“绕过抗生素选择：使用抗原依赖性增殖开关对转基因细胞进行阳性筛选”Nucleic Acids Res.. 31. e32 (2003)

Kimura, H. et al.: "Proceedings of JAACT 2002"Kluwer Academic Publishers(in press).

Kimura, H. 等人：“JAACT 2002 论文集”Kluwer 学术出版社（正在出版）。

河原正浩ら: "抗体-受容体キメラによる遺伝子導入細胞のポジティブ選択法"実験医学. (in press).

Masahiro Kawahara 等人：“使用抗体-受体嵌合体的转基因细胞的阳性选择方法”实验医学（正在出版）。

河原正浩ら: "抗体を用いた受容体のエンジニアリング-効果的な細胞医療を目指して-"バイオインダストリー. 20. 23-33 (2003)

Masahiro Kawahara 等人：“使用抗体进行受体工程 - 旨在实现有效的细胞疗法 -”Bioindustry 20. 23-33 (2003)。