抗腫瘍活性を高めるエフェクター細胞および樹状細胞の選択的増幅法の開発

开发效应细胞和树突状细胞的选择性扩增方法以增强抗肿瘤活性

• 批准号: 16023217
• 负责人: 長棟 輝行
• 金额: $ 3.84万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16023217/
• 关键词: 樹状細胞; 抗体; 受容体; 遺伝子治療; がん; 選択的増幅; 細胞障害性T細胞

本研究では、がん遺伝子治療における治療効果を向上させるために、抗体/サイトカイン受容体キメラを用いた遺伝子導入細胞の選択的増幅法を開発し、T細胞、樹状前駆細胞でその効果を検証することを目的としている。昨年度までに、エリスロポエチン受容体(EpoR)のEpo結合ドメインを抗リゾチーム抗体のV_H, V_Lまたは抗フルオレセイン(Fl)抗体のScFvで置換し、その細胞内ドメインをIL-6受容体β鎖であるgp130で置換したキメラ受容体(ScFv-gp130)が、Fl標識BSA(BSA-Fl)、もしくはFl dimerに応答して増殖シグナルを伝達することが示された。そこで、我々の手法がよりがん治療に直結する細胞においても適用可能かどうかを検討した。TIL、CTLの増殖はIL-2によって促進されることが報告されている。IL-2はIL-2Rに結合してβ鎖とγ鎖のヘテロダイマーを誘導して増殖シグナルを伝達することが知られている。そこでFl応答性キメラ受容体であるScFv-gp130の細胞内ドメインをIL-2Rβ鎖もしくはγ鎖に置換したキメラ受容体およびEGFPをIRESを介して1つにまとめたベクター(ScFv-IL-2Rβ-IRES-ScFv-IL-2Rγ-IRES-EGFP、およびβ鎖とγ鎖の順序が逆になったもの)を作製した。また、リゾチーム応答性キメラ受容体も同様に作製した(V_H-IL-2Rβ-IRES-V_L-IL-2Rγ-IRES-EGFP、およびβ鎖とγ鎖が逆になったもの)。これらのベクターをまずはIL-2Rのシグナルが伝達されることが分かっているBa/F3細胞に導入し、BSA-Flもしくはリゾチーム添加培地中で選択培養を行った結果、EGFP陽性細胞率はほぼ100%となったことから、キメラ受容体が機能的であることが示唆された。また、ScFv-IL-2R発現細胞は12merもしくは13merのDNAリンカー長を有するFl dimerに対しても顕著な増殖応答性を示した。続いて、これらのベクターを細胞障害性T細胞株CTLL-2に導入した結果、リゾチーム応答性キメラ受容体においてEGFP陽性細胞の選択的増幅が達成された。現在、CTLL-2におけるFl応答性キメラ受容体について、選択的増幅の実現可能性を検証している段階である。

在这项研究中，为了提高癌症基因治疗的治疗效果，我们开发了一种利用抗体/细胞因子受体嵌合体选择性扩增基因转移细胞的方法，并验证了其在T细胞和树突状祖细胞中的有效性。 。到去年，我们已经用抗溶菌酶抗体V_H、V_L或抗荧光素（Fl）抗体ScFv取代了促红细胞生成素受体（EpoR）的Epo结合域，并用IL-6受体gp130取代了细胞内结构域嵌合受体（ScFv-gp130）被Fl标记的BSA（BSA-Fl）或Fl取代。它被证明可以响应二聚体传递增殖信号。因此，我们研究了我们的方法是否可以应用于与癌症治疗更直接相关的细胞。据报道，IL-2可促进TIL和CTL的增殖。已知 IL-2 与 IL-2R 结合并诱导 β 和 γ 链异二聚体传递增殖信号。因此，制作了载体(ScFv-IL-2Rβ-IRES-ScFv-IL-2Rγ-IRES-EGFP，以及β链和γ链的顺序颠倒的载体)。此外，还类似地创建了溶菌酶反应性嵌合受体（V_H-IL-2Rβ-IRES-V_L-IL-2Rγ-IRES-EGFP，以及其中β链和γ链颠倒的一种受体）。首先将这些载体导入已知传递IL-2R信号的Ba/F3细胞中，并在补充有BSA-F1或溶菌酶的培养基中选择性培养。结果，EGFP阳性细胞率约为100%。 ，表明嵌合受体具有功能。此外，表达ScFv-IL-2R的细胞还表现出对具有12聚体或13聚体DNA接头长度的F1二聚体的显着的生长响应性。随后，这些载体被引入细胞毒性T细胞系CTLL-2中，导致溶菌酶反应性嵌合受体中EGFP阳性细胞的选择性扩增。我们目前正处于验证在CTLL-2中选择性扩增F1反应性嵌合受体的可行性的阶段。

项目成果

Selection of genetically modified cell population using hapten-specific antibody/receptor chimera

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2004.01.030
• 发表时间: 2004-02-27
• 期刊: BIOCHEMICAL AND BIOPHYSICAL RESEARCH COMMUNICATIONS
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kawahara, M;Kimura, H;Nagamune, T
• 通讯作者: Nagamune, T

抗体-受容体キメラによる遺伝子導入細胞のポジティブ選択法

使用抗体-受体嵌合体对转染细胞进行正选的方法

• 发表时间: 2004
• 期刊: 実験医学 22
• 作者: Kawahara;M.et al.;河原 正浩ら;河原 正浩ら
• 通讯作者: 河原 正浩ら

抗体を用いた受容体のエンジニアリング-効果的な細胞医療を目指して-

使用抗体工程受体 - 旨在实现有效的细胞治疗 -

• 发表时间: 2004
• 期刊: バイオインダストリー 20
• 作者: Kawahara;M.et al.;河原 正浩ら
• 通讯作者: 河原 正浩ら