エフェクター前駆細胞へのHIV抑制因子の遺伝子導入による新たな治療法の開発

通过将 HIV 抑制基因导入效应祖细胞来开发新的治疗方法

• 批准号: 15019008
• 负责人: 小柳 義夫
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15019008/
• 关键词: HIV; レンチウイルスベクター; エイズ; cDNAライブラリ; siRNA; CPE; CXCR4; CD14

HIVそのものを改良したレンチウイルスベクターはヒトTリンパ球へ遺伝子導入効率が優れている。このベクターを用いてHIVの増殖を抑制する遺伝子治療法を確立することを目的とした。今年度の成果はHIVのコレセプター分子であるCXCR4のmRNA発現を切断する小分子RNAであるsmall interfering RNA(siRNA)を発現するウイルスベクターを開発し、このベクターの導入により、HIVの感染を抑制できるようになったことである。さらに、ラムダファージインテグレースを利用した部位特異的組換え反応が可能なレンチウイルスベクター系を開発し、これを利用して効率よくcDNAライブラリを発現するレンチウィルスベクター実験系を確立した。そして、HIV感染よる細胞障害性を抑制する遺伝子の同定を試み、ヒト白血球cDNAライブラリよりCD14がその細胞障害性を強力に抑制することがわかった。今回のsiRNA発現レンチウイルスベクター、ならびに、cDNAライブラリ発現レンチウイルスベクターはいずれも新規のベクター系であり、さらに強力なHIVへの抑制活性を示す遺伝子導入系への改良が期待できる。また、レンチウイルスベクターは血液幹細胞を含んだ種々の細胞に遺伝子導入が可能であり、新規遺伝子治療法として期待されている。さらに、他の分子のsiRNAならびにCD14以外のHIV増殖性ならびに細胞障害性の長期的に抑制する遺伝子分離同定をめざしている。

慢病毒载体是HIV本身的改进版本，具有出色的基因转移效率，可将基因转移到人类T淋巴细胞中。本研究的目的是建立一种利用该载体抑制HIV增殖的基因治疗方法。今年的成就包括开发了表达小干扰RNA（siRNA）的病毒载体，这种小RNA可以裂解HIV辅助受体分子CXCR4的mRNA表达，并且引入这种载体可以抑制HIV感染。此外，我们开发了能够使用λ噬菌体整合酶进行位点特异性重组的慢病毒载体系统，并利用该系统建立了高效表达cDNA文库的慢病毒载体实验系统。然后我们试图鉴定一种抑制HIV感染引起的细胞毒性的基因，并从人类白细胞cDNA文库中发现CD14强烈抑制细胞毒性。表达siRNA的慢病毒载体和表达cDNA文库的慢病毒载体都是新的载体系统，预计它们将被改进为表现出更强的HIV抑制活性的基因转移系统。此外，慢病毒载体可以将基因导入包括血液干细胞在内的多种细胞中，有望作为一种新型的基因治疗方法。此外，我们的目标是分离和鉴定除 CD14 之外的其他 siRNA 分子和长期抑制 HIV 增殖和细胞毒性的基因。

项目成果

Miura Y, Koyanagi Y, Mizusawa H: "TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) induces neuronal apoptosis in HIV-encephalopathy."J.Med.Dental Sci.. 50・1. 17-25 (2003)

Miura Y、Koyanagi Y、Mizusawa H：“TNF 相关凋亡诱导配体 (TRAIL) 诱导 HIV 脑病中的神经元凋亡。”J.Med.Dental Sci.. 17-25 (2003)。

Ichiyama K, Yokoyama-Kumakura S, Tanaka Y, Tanaka R, Hirose K, Bannai K, Edamatsu T, Yanaka M, Niitani Y, Miyano-Kurosaki N, Takaku H, Koyanagi Y, Yamamoto N: "A duodenally absorbable CXC chemokine receptor 4 antagonist, KRH-1636, exhibits a potent and se

Ichiyama K、Yokoyama-Kumakura S、Tanaka Y、Tanaka R、Hirose K、Bannai K、Edamatsu T、Yanaka M、Niitani Y、Miyano-Kurosaki N、Takaku H、Koyanagi Y、Yamamoto N：“十二指肠可吸收 CXC 趋化因子受体

Miura Y, Misawa N, Kawano Y, Okada H, Inagaki Y, Yamamoto N, Ito M, Yagita H, Okumura K, Mizusawa H, Koyanagi Y: "Tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand induces neuronal death in a murine model of HIV central nervous system infection."Pro

Miura Y、Misawa N、Kawano Y、Okada H、Inagaki Y、Yamamoto N、Ito M、Yagita H、Okumura K、Mizusawa H、Koyanagi Y：“肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体在小鼠模型中诱导神经元死亡

Zahidunnai D M, Terashima K, Taruishi M, Hasegawa H, Ito M, Tanaka Y, Mori N, Sata T, Koyanagi Y, Okayama A, Fujii M, Yamamoto N: "Rapid tumor formation of human T-cell leukemia virus type 1-infected cell line in novel NOD/SCID/ gammac(null) mice(NOG) mic

Zahidunnai D M、Terashima K、Taruishi M、Hasekawa H、Ito M、Tanaka Y、Mori N、Sata T、Koyanagi Y、Okayama A、Fujii M、Yamamoto N：“人类 T 细胞白血病病毒 1 型的快速肿瘤形成

Suzuki Y, Misawa N, Sato C, Ebina H, Masuda T, Yamamoto N, Koyanagi Y: "Quantitative analysis of human immunodeficiency virus type 1 DNA dynamics by real-time PCR : Integration efficiency in stimulated and unstimulated peripheral blood mononuclear cells."

Suzuki Y、Misawa N、Sato C、Ebina H、Masuda T、Yamamoto N、Koyanagi Y：“通过实时 PCR 定量分析人类免疫缺陷病毒 1 型 DNA 动态：刺激和未刺激的外周血单核细胞的整合效率。”