臨床応用へ向けた人工皮膚付属器誘導細胞移植法の開発

开发临床应用的人工皮肤附属器引导细胞移植方法

基本信息

批准号：
22H03247
负责人：
岡崎睦
金额：
$ 10.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

皮膚創傷部位やその後の瘢痕、禿髪に対して、皮膚付属器を伴う皮膚再生を実現することは、無毛・乏毛・乾皮症の根本的な解決となる新しい治療法となりうる。我々は、マウス成体由来の上皮・間葉系細胞に特定の遺伝子群を遺伝子導入することによって「成熟した毛髪を含む皮膚付属器の再構成能を与える方法」の開発に成功してきた。本研究では、この技術をヒト細胞に応用するべく、研究を進めている。臨床応用を想定して、成人皮膚由来細胞に対する毛包・皮膚付属器誘導能付与方法の開発を進めるため、市販されているヒト成人由来ケラチノサイト、ヒト成人由来脂肪由来間葉系細胞、ヒト成人由来線維芽細胞を用いた検討を行った。それぞれ培養条件下に、レトロウイルスベクターを用いて、既に同定している皮膚付属器再構成能・再生能・誘導能を付与するための遺伝子セットについて遺伝子導入を行ったのち、ヌードマウスの背部に装着したシリコンチャンバー内に混合移植した。マウスの免疫応答によりヒト細胞の生着が拒絶されたため、より免疫能の低いNod-SKIDマウス、さらにNSGマウスに変更した。また、遺伝子導入効率を向上させるため、薬剤選択を併用したレンチウイルスベクターに変更し遺伝子導入を行った。今のところ組織切片による組織学的形状評価ではヒト細胞による発毛の証明には至っていないが、その一方で、ヒト細胞の検出法として、抗ヒト核抗体や抗ヒトミトコンドリア抗体を用いて様々なヒト免疫組織化学染色の手法を検討・最適化を行い、精度の高い検出法を確立している。

实现涉及皮肤伤口部位的皮肤附属器、随后的疤痕和秃头的皮肤再生可能是一种新的治疗方法，为无毛、少毛和干皮病提供根本解决方案。我们成功开发了一种方法，通过将特定的基因组引入成年小鼠的上皮细胞和间充质细胞中，赋予重建皮肤附属物（包括成熟毛发）的能力。在这项研究中，我们正在继续研究将该技术应用于人体细胞。为了开发赋予成人皮肤来源的细胞诱导毛囊和皮肤附属器能力的方法以期待临床应用，市售的人成人来源的角质形成细胞、人成人来源的脂肪来源的间充质细胞，并使用人类成人间充质细胞进行了一项使用成纤维细胞的研究。在每种培养条件下，使用逆转录病毒载体导入先前鉴定的用于赋予重建皮肤附属器能力、再生能力和诱导能力的基因组，然后将基因混合物移植到裸鼠的背部。进入附加的硅室。由于小鼠免疫反应拒绝人类细胞的植入，因此我们改为免疫能力较低的Nod-SKID小鼠，然后是NSG小鼠。此外，为了提高基因转移效率，采用慢病毒载体结合药物筛选进行基因转移。迄今为止，使用组织切片的组织学形状评估尚未证明毛发生长是由人体细胞引起的，但另一方面，我们已使用各种方法使用抗人核抗体和抗人线粒体抗体来检测人体细胞。正在研究和优化人类免疫组化染色方法，建立高精度的检测方法。