レンチウイルスベクターによる新規癌転移遺伝子の網羅的探索とその抑制法の開発研究

利用慢病毒载体全面寻找新型癌症转移基因并开发抑制方法的研究

基本信息

批准号：
17016040
负责人：
小柳義夫
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17016040/
关键词：
乳がん細胞レンチウイルスベクターがん転移 HIV CXCR4 CD63

项目摘要

cDNA発現レンチウイルスベクターを用いた実験系より、ケモカイン分子であるSDF-1のレセプター分子(CXCR4)の細胞膜上の発現を抑制する遺伝子(CD63dN)を得ることができた。このCXCR4は乳がん細胞の血行性肺転移の過程において重要な役割を果たしていることが、がん細胞転移評価実験により明らかとなっているので、レンチウイルスベクターを用いてCD63dNを乳がん細胞(MDA-MB-231)に導入し、その転移能を抑制することを目的とした実験を行った。がん転移評価実験系として、重度免疫不全マウスであるNOGマウスに上記の細胞を尾静脈から移植し、その転移能の変化をFACSおよびHE染色により解析した。また、SDF-1/CXCR4シグナルによるがん細胞のactin重合促進作用についても、Phalloidin染色により解析した。その結果、細胞移植後30日以内にNOGマウスから肺を摘出し、ヒト細胞を分画・回収したところ、CD63dN導入細胞を移植したものにおいては、CXCR4の発現が持続的に抑制されていることが確認された。また、肺組織のHE染色解析から、CD63dN導入細胞を移植したNOGマウスでは、導入していない細胞を移植したものに比して、肺への転移が顕著に抑制されていた。さらに、Phalloidin染色により、CD63dN導入細胞では、actin重合が有意に抑制されることが確認された。現在までのところ、MDA-MB-231細胞以外のがん細胞においても、CD63dN導入によりその転移能が抑制されるという結果が得られている。CD63dN導入によるin vitroにおける細胞毒性は確認されていないことからも、この方法ががんの遺伝子治療において有用な方法の一つとなり得ると考える。

从使用表达cDNA的慢病毒载体的实验系统中，获得了在细胞膜上抑制趋化因子分子SDF-1（CXCR4）表达的基因（CD63DN）。由于癌细胞转移的评估实验表明，CXCR4在乳腺癌细胞的血源性肺肺转移过程中起着重要作用，因此我们进行了一项实验，目的是将CD63DN引入乳腺癌细胞（MDA-MB-231）（MDA-MB-231），并使用肺炎病毒载体，并抑制其转移的潜力。作为用于癌症转移评估的实验系统，将上述细胞植入了NOG小鼠中，NOG小鼠从尾静脉中植入严重免疫缺陷的小鼠，并通过FACS分析了其转移潜力的变化并染色。此外，还通过腓罗染色分析了由SDF-1/CXCR4信号引起的癌细胞的肌动蛋白聚合启动子的作用。结果，在细胞移植后30天内将肺从NOG小鼠中去除，并收集人类细胞，并确认CXCR4表达在被CD63DN transdands抑制细胞移植的患者中受到抑制。此外，他对肺组织的染色分析表明，与未经转导细胞移植的细胞相比，用CD63DN转导的细胞移植的NOG小鼠显着抑制了向肺的转移。此外，胶体素染色证实，在CD63DN转导的细胞中，肌动蛋白聚合受到显着抑制。迄今为止，已经发现CD63DN转移抑制了其在MDA-MB-231细胞以外的癌细胞中的转移潜力。由于尚未证实由于CD63DN引入的体外细胞毒性，因此该方法可能是癌症基因治疗的有用方法之一。