大脳新皮質形成過程におけるカハール・レチウス細胞と皮質板細胞のクロストーク

新皮质形成过程中 Cajal-Retius 细胞和皮质板细胞之间的串扰

基本信息

批准号：
15016051
负责人：
福田敦夫
金额：
$ 3.33万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.マウス胎仔脳への電気穿孔法を用いたEGFP遺伝子導入による移動細胞の可視化(井上、山田、福田):分化直後の神経細胞に特異的にEGFPを発現させて移動過程を可視化する為、子宮内胎仔へのin vivo電気穿孔法により遺伝子導入を行った。すなわち、胎齢13日のマウス胎仔の側脳室にCAGプロモーターにEGFPあるいはDsRed2遺伝子を繋いだプラスミドを注入し、パルス電圧を加え脳室帯で分化直後の神経細胞に遺伝子導入した。これらの細胞がEGFP/DsRed2の蛍光を発しながら脳室帯から皮質板へ移動してinside-outの細胞配置により皮質を形成することを経時的に確認できた。これにより、細胞の発生時期を蛍光で識別することが可能になった。2.皮質板細胞でのCl^-ホメオスタシス調節遺伝子群発現バランスと細胞移動の解析(山田、岡部、福田):子宮内胎仔へのin vivo電気穿孔法により、分化直後の細胞(EGFP蛍光)にKCC2遺伝子を強制発現させ、[Cl^-]_iを低下させた細胞で細胞移動に変化があるかを調べた。まだ例数が少ないため、結論を得るために今後例数を増やす。グラミシジン穿孔パッチクランプ法でCl^-平衡電位を測定し、実際に[Cl^-]_iが低下していることを確認して、移動や[Cl^-]_iとの関係を明らかにする。3.辺緑帯におけるCajal-Retzius細胞間のクロストークの解析(福田、岡部、Luhmann):Cajal-Retzius細胞のグリシン受容体サブユニット(α1-3,β)とKCC2,NKCC1のmRNAの発現パターンを皮質板細胞と比較した。グリシン受容体はいずれもα2/βのヘテロであり、密度はCajal-Retzius細胞>皮質板細胞であった。また、両者ともNKCC1>KCC2の発現パターンを示したが、この傾向はCajal-Retzius細胞でより顕著であった。辺縁帯のtangential sliceを作成し、Cajal-Retzius細胞間のクロストークを膜電位イメージングで可視化したところ、グルタミン酸ではなくGABAとタウリンが興奮の伝播をになっており、NKCC1作用による[Cl^-]_i高値が関与していた。マイクロダイアライシス法ではタウリンが刺激応答的に増加することを発見した。

1。通过使用电穿孔方法引入小鼠胎儿大脑（Inoue，Yamada，Fukuda）来可视化移动细胞：在分化后立即引入了神经细胞中的神经细胞中的运动过程。子宫胎儿的穿孔方法。换句话说，将连接EGFP或DSRED2基因连接的质粒注入了CAG启动子，并在胎儿时代的第13天注入小鼠胎儿胎儿的侧脑腔，并在后立即将脉冲电压添加到神经细胞中。大脑区域的分化。随着时间的流逝，这些细胞从脑室移动到皮质板，同时散发出EGFP/DSRED2的荧光，以通过内而外的细胞排列形成皮质。结果，可以通过细胞的出现来识别荧光。 2。cl^-HomeoStasis调整遗传遗传意图平衡和细胞运动分析（Yamada，Okabe，Fukuda）：在分化后立即用于内部胎儿胎儿（EGFP荧光）的体内电浇注方法（EGFP荧光）（EGFP Pluorescent）被强行表达，并在降低[Cl^ - ] _ i的细胞中更改细胞。由于案件数量仍然很少，因此将来将增加案件的数量以获得结论。 GRAMICIDINE穿孔贴片夹方法测量了Cl^平衡电位，证实了[Cl^ - ] _ i实际上正在减少，并阐明了与[Cl^ - ] _ I.的关系。 3。分析Cajal-Retzius细胞（Fukuda，Okabe，Luhmann）：Cajal-Retzius细胞Glycine受体亚基（α1-3，β）和KCC2，NKCC1的NKCC1表达模式，mRNA的NKCC1表达模式与皮质板细胞进行了比较。所有甘氨酸受体均为α2/β的杂种，密度为Cajal-Retzius细胞>皮质细胞。他们俩都显示了NKCC1> KCC2的表达模式，但是这种趋势在Cajal-Retzius细胞中更为突出。当创建该区域的切线切片，并通过膜电位成像可视化Cajal-Retzius细胞之间的串扰时，GABA和牛磺酸的兴奋而不是谷氨酸。微型Diresis方法发现牛磺酸在刺激反应中增加。