新たに発見されたミダゾラムのシナプス前作用の機構解明をめざす生理学的アプローチ

旨在阐明新发现的咪达唑仑突触前作用机制的生理学方法

基本信息

批准号：
18659459
负责人：
福田敦夫
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.ミダゾラムの大脳新皮質微小抑制性シナプス後電流頻度とGABA神経終末α7ニコチン受容体に対する作用の解析[山本・福田・岡部]:生後2-3週齢のラットの脳スライス標本を作成し、大脳皮質体性感覚野V層の錐体細胞にパッチクランプを行い、GABA_A受容体を介する微小抑制性シナプス後電流(mIPSC)を記録して、ミダゾラムの作用をジアゼパム、フルニトラゼパム、ゾルピデムと比較した。すべての薬剤でmIPSC振幅が増大したが、頻度を増加させたのはミダゾラムのみであった。ベンゾジアゼピン受容体阻害剤のフルマゼニールはべての薬剤のmIPSC振幅増大作用を完全に遮断したが、ミダゾラムの頻度増加作用に効果なく、未知の作用経路が示唆された。この新奇作用はII/III, IV, VI層では起こらなかった。介在ニューロン細胞体へのニコチン直接投与反応に対しミダゾラムは効果なく、この作用はV層のGABA神経終末特異的であった。シナプスブートン標本を用いて神経終末に局在するα7ニコチン受容体を蛍光ラベルして膜移行を共焦点顕微鏡のリアルタイム3D法により解析した結果でも、mIPSC頻度を解析した結果でも、ミダゾラムの新奇作用はPKCインヒビターのcalphostin Cとbisindolylmaleimideによって抑制され、PKCアクチベーターのphorbol 12,13-dibutyrateによって促進したことから、PKCの関与が考えられた。2.ミダゾラムによるα7ニコチン受容体の膜移行を仲介する細胞内情報伝達分子の検討[福田・山本・熊田]:ミダゾラムにより活性化される神経終末のPKCアイソフォームを同定するため、フルマゼニールでポストシナプス作用をブロックした状態でPKCのリン酸化部位認識抗体を用いて脳スライスhomogenateのwestern blottingを行った。その結果、ミダゾラムもフルマゼニールもPKCによるリン酸化を促進した。

1。咪达唑仑的新大脑皮层显微镜细胞纤维化频率和GABA神经末端α7对尼古丁受体的作用分析[Yamamoto，Fukuda，Okabe]：在出生后2-3周创建了大脑切片样品。记录了通过GABA_A受体的脑皮质感觉场V -layer和随后的电流（MIPSC），并将咪达唑仑的作用与Ziazepam，Fulnitrazepam和Zolpidem进行了比较。 MIPSC幅度随着所有药物而增加，但只有咪达唑仑增加了频率。苯二氮卓类受体（全麦唑尼）完全阻断了所有药物的MIPSC效果，但建议对咪达唑仑的频率产生未知的影响。这个新手没有发生在II/III，IV，VI层中。咪达唑仑对尼古丁直接给予对神经元细胞中神经元细胞的反应无效，并且这种作用特异于V -layer Gaba神经。通过使用α7尼古丁受体的真实时间3D方法分析MIPSC频率，分析了咪达唑仑的新效果，该方法通过使用荧光标记的荧光标记荧光灯在末尾使用突触启动式尼古丁样品，该方法位于神经的末端通过荧光标记CO-焦点显微镜的真实时间3D方法的荧光标记，因为PKC的参与被PKC Inhyobiter Calphostin C和Bisindorylmaleimide抑制并由PKC Activator Phorbol Phorbol 12,13 -Dibutyrate抑制。 2。检查通过PKC的磷酸化位点识别抗体，对脑切片匀浆的介导α7尼古丁受体的过渡的检查进行了检查。结果，咪达唑仑和全马济尼都通过PKC促进了磷酸化。