インビボ胎仔大脳皮質におけるクロライドトランスポーターKCC2の翻訳後修飾

体内胎儿大脑皮层氯离子转运蛋白 KCC2 的翻译后修饰

基本信息

批准号：
20021015
负责人：
福田敦夫
金额：
$ 4.29万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

1. KCC2蛋白機能抑制因子の検討-(2)(液性因子の検討):[福田]培養液中に17β-estradiol、progesteron、タウリンを加えて培養し、パッチクランプで異所性KCC2発現細胞のGABA逆転電位を測定し[Cl-]_i変化を検討した。タウリンのみ、GABA逆転電位を脱分極側にシフトさせたので、KCC2蛋白機能を抑制したと考えられた。2. 異所性KCC2蛋白の発達的機能変化とリン酸化/脱リン酸化の関与:[福田、古川]胎仔脳のスライスを作製して異所性KCC2を発現した細胞(EGFP発現)からパッチクランプ法により[Cl-]_iを測定した。脱リン酸化阻害剤vanadateは胎齢18日でも生後1週齢でも効果なく、リン酸化阻害剤staurosporineは異所性KCC2がまだ機能していない胎齢18日では効果なかったが、機能し始める生後1週では[Cl-]_iを低下させたので、KCC2蛋白の機能抑制にはリン酸化が関与している可能性が示唆された。インビボ胎仔皮質板細胞で一過性に豊富なタウリンが関与する可能性がある。3. 異所性KCC2蛋白の発達的機能変化とオリゴマー化の関係:[熊田、福田]強制発現させたKCC2のオリゴマー化の阻害が原因で機能発現しない可能性を検討するため、sulfhydry1還元剤を含まないdetergentを用いて異所性発現させたKCC2のWestern blottingを行った。異所性KCC2のバンドは抗Flag抗体(1:1000)を用いて同定し、タウリンの有無での異所性KCC2のモノマー/オリゴマー比を比較してオリゴマー化の差を解析したが、有意な差は認めなかった。以上から、細胞内タウリンの異所性KCC2蛋白機能抑制作用にはオリゴマー化の障害は関係していないと結論した。

1。检查KCC2蛋白抑制因子 - （2）（液体因子的研究）：[福生]17β-雌二醇，孕激素和牛磺酸在培养物中培养，并且斑块夹在窃听KCC2表达细胞。测量并检查了更改。只有牛磺酸，GABA逆转电势被转移到细分侧，因此人们认为KCC2蛋白功能被抑制。 2。参与异位KCC2蛋白发育和磷酸化/磷酸化的发展：[福川，furukawa]斑块夹（EGFP表达）（EGFP表达）（EGFP表达）表达了异位KCC2。。 DE磷酸化的抑制剂杂质对18天或出生后一周的年龄没有影响，磷酸化的抑制剂标准不适用于18天的胎儿年龄，但它尚未起作用，但是它已经开始发挥作用，由于[Cl-] _ i被降低，因此建议磷酸化参与抑制KCC2蛋白的功能。 Invivobo胎儿皮层细胞可能与临时牛磺酸有关。 3。异位KCC2蛋白的发育功能的发展与寡聚化之间的关系：[Kumada，Fukuda]硫磺1还原剂被检查以检查由于抑制KCC2寡聚而被迫被迫被迫表达功能的可能性Express。使用未包括洗涤剂表示外部性质的KCC2。使用抗-Flag抗体（1：1000）鉴定出外部性质KCC2的带，并通过比较外部性质KCC2的单体/寡聚比与存在或不存在牛磺酸的单体/低聚物比例来分析寡聚体转化的差异不同之处。从上面，我们得出的结论是，细胞内牛磺酸的急切KCC2蛋白功能与寡聚疾病无关。