大脳皮質形成期の接線方向移動と放射状移動の細胞間クロストークにおけるCl^‐の役割

Cl^- 在大脑皮质生成过程中切向和径向迁移过程中细胞间串扰的作用

基本信息

批准号：
16015252
负责人：
福田敦夫
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Hamamatsu University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.GFPとHcRed標識による接線方向移動細胞と放射状移動細胞の識別[井上・山田・福田]:GAD67-GFP knock-inマウス(C57BL/6j)胎仔にHcRed遺伝子を胎生14日に電気穿孔法で脳室帯の新生ニューロンに導入し、発達の各段階で脳スライスを作成した。接線方向移動中のGABA細胞(GFP蛍光)と放射状移動中のglutamate細胞(HcRed蛍光)が識別できた。放射状移動細胞は大脳皮質II/III層を形成し、接線方向移動細胞は主に中間帯と辺縁帯を移動し、中間帯から皮質版に進入していた。2.radial移動細胞における細胞内Cl^-濃度とCl^-トランスポーター遺伝子発現変化の解析[福田・窪田・山田・Luhmann]:グラミシジン穿孔パッチクランプ法で、放射状移動中のglutamate細胞のGABA/グリシン反応とCl^-平衡電位を測定して、Cl^-トランスポーターとGABA_A/グリシン受容体mRNAのsingle-cell RT-PCRを行った。その発現パターンを各々の細胞の発生時期や移動状態のちがいで比較し、放射状移動細胞の[Cl^-]_i高値と、定着後の[Cl^-]_i低下に伴うGABA_A/グリシン作用の興奮→抑制転換の分子的要因を明らかにした。また、辺縁帯のCajal-Retzius細胞でもグリシン(タウリン)反応と[Cl^-]_iを解析し、グリシン受容体サブユニット(α1-α3,β)とCl^-トランスポーターのmRNAの発現を解析したところ、NKCC1優位でα2βのヘテロであった。3.電気穿孔法を用いたKCC2強制発現による細胞移動の[Cl^-]_i依存性の証明[福田・井上・窪田]:Flag-KCC2を発現するコンストラクトのプラスミドを調整し、EGFPのプラスミドと同時に電気穿孔法で胎仔脳室帯の同一の新生神経細胞に選択的に導入した。KCC2を強制発現した細胞をEGFP蛍光によって同定したが、radial移動は正常で[Cl^-]_iも高値のままであった。

1.通过GFP和HcRed标记鉴定切向迁移细胞和径向迁移细胞[Inoue, Yamada, Fukuda]：在妊娠第14天通过电穿孔将HcRed基因导入GAD67-GFP敲入小鼠（C57BL/6j）胎儿中将它们引入脑室区的新生神经元中，并在每个发育阶段制作脑切片。可以区分切向迁移的 GABA 细胞（GFP 荧光）和径向迁移的谷氨酸细胞（HcRed 荧光）。径向迁移细胞形成大脑皮质的II/III层，切向迁移细胞主要迁移通过中间区和边缘区，从中间区进入皮质板。 2. 径向迁移细胞内Cl^-浓度和Cl^-转运蛋白基因表达变化的分析[Fukuda, Kubota, Yamada, Luhmann]：采用短杆菌肽穿孔膜片钳法检测径向迁移的谷氨酸细胞中的GABA/甘氨酸测量反应和Cl 2 -平衡电位，并进行Cl 2 -转运蛋白和GABA_A/甘氨酸受体mRNA的单细胞RT-PCR。我们比较了每个细胞在不同发育时期和迁移状态下的表达模式，发现径向迁移细胞中的高[Cl^-]_i值以及GABA_A/甘氨酸作用的兴奋与[Cl^-]_i的减少相关。 ]_i 定植后。 →我们阐明了抑制转化的分子因素。我们还分析了边缘区 Cajal-Retzius 细胞中的甘氨酸（牛磺酸）反应和 [Cl^-]_i，并测定了甘氨酸受体亚基 (α1-α3,β) 和 Cl^-转运蛋白 mRNA 的表达。 NKCC1 为显性且 α2β 杂合。 3.通过使用电穿孔强制表达KCC2来证明细胞迁移的[Cl^-]_i依赖性[Fukuda，Inoue，Kubota]：制备用于表达Flag-KCC2的构建体的质粒，并制备用于EGFP的质粒。同时，使用电穿孔将它们选择性地引入胎儿心室区的相同新生神经元中。通过EGFP荧光鉴定强制表达KCC2的细胞，但径向迁移正常并且[Cl^-]_i仍然很高。

项目成果

期刊论文数量（18）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Characterization of newly cloned variant of rat glycine receptor α1 subunit.

新克隆的大鼠甘氨酸受体 α1 亚基变体的表征。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Biochem.Biophys.Res.Commun. 327
影响因子：
0
作者：
Ban;T.et al.;Toyoda H. et al.;Ueta Y.et al.;Inoue K. et al.
通讯作者：
Inoue K. et al.

Differential expression of KCC2 accounts for the differential GABA responses between relay and intrinsic neurons in the early postnatal rat olfactory bulb.

KCC2 的差异表达解释了出生后早期大鼠嗅球中继神经元和内在神经元之间的差异 GABA 反应。

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Eur.J.Neuroscl. (in press)
影响因子：
0
作者：
Ban;T.et al.;Toyoda H. et al.;Ueta Y.et al.;Inoue K. et al.;Wang C.et al.
通讯作者：
Wang C.et al.

Malfunction of respiratory related neuronal activity in Na^+, K^+-ATPase α2 subunit-deficient mice is due to abnormal Cl^- homeostasis in brainstem neurons.

Na^+、K^+-ATPase α2 亚基缺陷小鼠呼吸相关神经元活动功能障碍是由于脑干神经元中 Cl^- 稳态异常所致。

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
J.Neurosci. 24
影响因子：
0
作者：
Ban;T.et al.;Toyoda H. et al.;Ueta Y.et al.;Inoue K. et al.;Wang C.et al.;Inoue K. et al.;Yamada J. et al.;Uchida K. et al.;Ikeda K. et al.
通讯作者：
Ikeda K. et al.

外側膝状体のクロライドトランスポーターとクロライドホメオスタシス

外侧膝状体内的氯离子转运蛋白和氯离子稳态

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
生体の科学 55(6)
影响因子：
0
作者：
Ban;T.et al.;Toyoda H. et al.;Ueta Y.et al.;Inoue K. et al.;Wang C.et al.;Inoue K. et al.;Yamada J. et al.;Uchida K. et al.;Ikeda K. et al.;福田敦夫
通讯作者：
福田敦夫