Apollonによる細胞周期制御因子のユビキチン化と細胞分裂期の制御

Apollon 对细胞周期调节因子的泛素化和细胞分裂阶段的调节

基本信息

批准号：
20058008
负责人：
内藤幹彦
金额：
$ 3.71万
依托单位：
National Institute of Health Sciences (2009)The University of Tokyo (2008)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20058008/
关键词：
Apollon サイクリンユビキチン FLIP

项目摘要

昨年度までの研究で、アポトーシス阻害タンパク質ApollonがCyclinAをユビキチン化するが、このユビキチン化にはApollonのUBCドメインは関与しないことが明らかになっていた。今年度はApollonによるCyclinAユビキチン化の詳細な分子機構を解析し、ApollonがAnaphase Promoting Complex/Cyclosome(APC/C)と協調してCyclinAをユビキチン化することを明らかにした。ApollonはAPC/CのコアサブユニットであるAPC3やAPC11と結合した。またAPC11とCyclinAとの結合はApollonを発現することにより顕著に増加した。さらにin vitroユビキチン化実験で、APC/CによるCychnAユビキチン化はApollonを加えることにより増加した。これらの結果からApollonによるCyclinAのユビキチン化にはApollonのUBCドメインではなく、APC/CによってリクルートされたE2-UBCが関与することが明らかになった。FLIPの細胞内局在制御とFLIPによるWntシグナル増強メカニズムを解析し、FLIP-LはC末の核移行シグナル依存的に核に移行し、核のFLIP-Lはb-catenin転写複合体に存在することを明らかにした。これらの結果からFLIP-Lは細胞内ユビキチン化を阻害する事によりWntシグナルのメディエーターであるb-cateninを増加させるだけでなく、核に移行して転写活性を制御することにより細胞増殖に関与することが明らかになった。

直到去年的研究表明，凋亡抑制蛋白 Apollo 泛素化 CyclinA，但 Apollo 的 UBC 结构域不参与这种泛素化。今年，我们分析了Apollon对CyclinA泛素化的详细分子机制，揭示了Apollon与Anaphase Promoting Complex/Cyclosome (APC/C)合作泛素化CyclinA。 Apollon 与 APC/C、APC3 和 APC11 的核心亚基结合。此外，通过表达 Apollon，APC11 和 CyclinA 之间的结合显着增加。此外，在体外泛素化实验中，APC/C 对 CychnA 的泛素化通过添加 Apollon 得到增强。这些结果表明，Apollon 对 CyclinA 的泛素化涉及 APC/C 招募的 E2-UBC，而不是 Apollon 的 UBC 结构域。我们分析了FLIP的亚细胞定位控制以及FLIP对Wnt信号的增强机制，发现FLIP-L以C端核转位信号依赖的方式转位至细胞核，细胞核中的FLIP-L存在于细胞核中。 b-连环蛋白转录复合物宣布了这一点。这些结果表明，FLIP-L不仅通过抑制细胞内泛素化来增加Wnt信号介质b-连环蛋白，而且还通过易位到细胞核并控制转录活性来参与细胞增殖。